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Produção in vitro de embriões bovinos: uso da glutationa durante o processo de lavagem e capacitação espermática
(Universidade Federal do Pará, 2007-11-16) ANDREOTI, Magna; OHASHI, Otávio Mitio; http://lattes.cnpq.br/5547874183666459
O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da glutationa (GSH – 0,3mg/mL), no processo de separação, lavagem e capacitação espermática sobre a taxa de produção in vitro de embriões bovinos. O sêmen de um touro foi separado através de gradientes de Percoll e centrifugados duas vezes em meio de fecundação in vitro (lavagem). Espermatozóides foram capacitados in meio de FIV durante 1 h em estufa úmida a 38,5°C e 5% de CO2. Os grupos experimentais foram: Controle (não possui a etapa de lavagem; Grupo 1: sem GSH nas três etapas; Grupo2: GSH somente na capacitação; Grupo3: GSH somente na separação e na lavagem (primeira lavagem); Grupo 4: GSH em todas as etapas. Oócitos provenientes de abatedouro foram maturados in vitro e fertilizados após as preparações feitas no sêmen. Os embriões foram cultivados durante 7 dias com análise da clivagem no 2º dia, taxa de blastocisto e número total de células embrionárias no 7º dia. As taxas de desenvolvimento embrionário foram analisadas pelo qui-quadrado (χ2) e a qualidade embrionária pela ANOVA através do programa Bio Estat 3.0 (AYRES, et al., 2003) com nível de significância de 5%. Não houve diferença estatística efeito do uso da GSH nas diferentes etapas do processo de preparação espermática sobre as taxas de clivagem, blastocisto e eclosão (Grupo Controle: 52, 35 e 50%; Grupo 1: 60, 37 e 44%; Grupo 2: 57, 40 e 50; Grupo 3: 56, 37 e 51%; Grupo 4: 47, 30 e 48%, respectivamente, p>0,05). Também não foi observado diferença estatística quanto ao número de células embrionárias (Grupo Controle: 30,9±21,87, Grupo 1: 57,8±18,26; Grupo 2: 66,2±20,14; Grupo 3: 62,1±22,48; Grupo 4: 76,7±29,28; p>0,05).
Acesso aberto (Open Access)
Produção in vitro de embriões bubalinos na ilha do Marajó
(Universidade Federal do Pará, 2022-02-24) RAMOS, Anelise de Sarges; SANTOS, Simone do Socorro Damasceno; http://lattes.cnpq.br/4573238690293498; MIRANDA, Moysés dos Santos; http://lattes.cnpq.br/3354029928888919; https://orcid.org/0000-0001-7771-8174
Visando estudar biotécnicas reprodutivas que possam melhorar a produção embriões in vitro na Amazônia. O experimento objetivou analisar os efeitos dos níveis pluviométricos, sêmen utilizado, crioprotetores (diluidores) de sêmen, presença do folículo dominante e corpo lúteo sobre a quantidade e qualidade de oócitos e na taxa de embriões. O experimento foi realizado na fazenda Paraíso no município de Cachoeira do Arari, Ilha do Marajó - PA, durante de um ano. Folículos com diâmetro acima de 4,0 mm foram obtidos pela técnica de aspiração folicular – Ovum Pick-up (OPU), guiada por ultrassonografia. Foram selecionadas 40 búfalas para OPU e três reprodutores para colheita seminal, todos da raça Murrah e em idade reprodutiva. Para criopreservação foram testados os diluidores BotuBov® e o Tes-Tris. Os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram processados no Laboratório de Produção in vitro da Escola de Ensino Técnico do Estado do Pará (EETEPA). Os melhores (CCOs) foram maturados, fertilizados e cultivados in vitro, após seis dias, os embriões foram qualificados e quantificados, usando a técnica desenvolvida pelo laboratório de FIV da UFPA. O diluidor BotuBov® foi o diluidor usado na PIVE por apresentar melhor motilidade progressiva (p<0,05), (70,70% ± 10,90%) em relação ao Tes- Tris (60,42% ±6,00%). Não houve diferença estatística (p> 0,05) nas médias e desvio padrão dos folículos total aspirados, (11,75±5,23), de folículos aspirados por animal (11,23±1,39), de CCOs rastreados total (10,5±61,65) e de CCOs rastreados por animal (5,96±1,56) entre a estação chuvosa e a menos chuvosa (folículos totais aspirados 12,47±4,86, folículos aspirados por animal 11,74±1,04, CCOs rastreados total 118,5±12,02 e CCOs rastreados por animal 7,27±0,83) respectivamente. Assim como, não houve diferença significativa (p>0,05) na presença do corpo lúteo e de folículos dominantes e do escore de condição corporal (ECC). Nas taxas de embriões, também não houve diferença estatística (p>0,05), entre estações mais chuvosa (25,25% ±0,64%) e menos chuvosa (19,37% ±14,06%), respectivamente. Não verificamos diferenças estatísticas nas taxas de embriões, (p>0,05) em relação ao sêmen utilizados (59,33% ±22,27%, 38,29% ±20,35% 54,17% ±31,55%). Desta forma, concluímos que as variáveis estudadas não influenciaram na produção de embriões.
Acesso aberto (Open Access)
Produção in vitro de embriões de caititu (Pecari tajacu) criados em cativeiro
(Universidade Federal do Pará, 2014-06-13) FERREIRA, Ana Cássia Sarmento; GUIMARÃES, Diva Anelie de Araújo; http://lattes.cnpq.br/2891287458034896
Trata-se da aplicação de biotecnicas de reprodução na espécie Pecari tajacu para melhorar seu potencial para a criação em cativeiro visando sua produção, conservação e multiplicação de recursos genéticos. Para determinar o tempo de maturação in vitro foram utilizados 48 fêmeas, foram selecionados 69 CCOs e divididos em 4 grupos por idade e tempo de MIV, e então submetidos a ativação partenogenética em Ionomicina e 6-DMAP. Para análise da progressão meiótica 165 oócitos foram divididos em 4 grupos conforme a suplementação de hormônios na MIV e tempo de maturação. Na criopreservação foram utilizados espermatozoides epididimários de 9 machos, diluídos em Tris-frutose e ACP-120 e divididos em grupos de refrigeração a 4ºC e congelamento a -196ºC e presença da glutationa (GSH), foram avaliados os parâmetros motilidade, vigor e viabilidade após a diluição a fresco e criopreservação. Para a produção de embriões, 97 oócitos após MIV de 36 horas foram divididos grupos de ativação partenogenética, FIV e ICSI. Através da ativação partenogenética obteve-se taxas de clivagens (47%) para os oócitos de fêmeas com menos de 2 anos submetidos a MIV em 36 horas, em todos os grupos observaram-se clivagens porém não houve diferenças significativas (P>0,05) entre os grupos analisados, observou-se taxa de blastocisto (15,4%) somente no grupo de oócitos ativados após MIV de 44 horas. Na analise da progressão meiótica, em todos os tempos analisados foram encontrados oócitos em MII. Na criopreservação dos espermatozoides observaram-se queda nos parâmetros analisados nos dois diluidores em todos os grupos, a presença da glutationa não interferiu significativamente nos parâmetros analisados. No resfriamento, as taxas de motilidade e viabilidade foram superiores no ACP-120 (> 50%) e no congelamento em tris-frutose (33% e 18%). A produção de embriões in vitro foi bem sucedida na ativação partenogenética (62,9%) e na ICSI (52,6%), na FIV as taxas foram baixas (7%), a produção de blastocisto ocorreu somente nos embriões partenotos (4,5%). Os resultados mostraram a viabilidade de biotecnicas reprodutivas como conservação de gametas, e produção in vitro de embriões na espécie Pecari tajacu.
Acesso aberto (Open Access)
Uso da L-arginina nos processos de capacitação espermática e fecundação in vitro de oócitos bovinos
(Universidade Federal do Pará, 2010) SILVA, Thiago Velasco Guimarães; OHASHI, Otávio Mitio; http://lattes.cnpq.br/5547874183666459
O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso da L-arginina nos processos de capacitação espermática e fecundação in vitro (FIV), analisando sua influência no desenvolvimento embrionário, utilizando o sêmen de dois touros (Bos taurus e Bos indicus). No experimento 1, os espermatozóides foram incubados, sem a presença de oócitos, durante 0, 1, 2 e 3 h em meio de FIV adicionado de 0, 1, 10 e 50 mM de L-arginina, sendo analisada a taxa de reação acrossômica. No experimento 2, espermatozóides e oócitos foram incubados em meio de FIV acrescido com as concentrações de L-arginina citadas anteriormente, durante aproximadamente 30 h. Os oócitos bovinos foram maturados in vitro (MIV) e o subsequente cultivo embrionário (CIV) foi realizado sobre monocamada de células da granulosa, em meio SOF, sendo avaliadas as taxas de fecundação (18 hpi), clivagem e blastocisto (2º e 7º dia de cultivo, respectivamente). A dosagem de NO3-/NO2- produzido durante a FIV foi realizada através do método colorimétrico de Griess. Para análise estatística dos dados, foi utilizado a ANOVA, com nível de significância de 5%. A Larginina (1 mM), quando adicionada ao meio de capacitação espermática, durante duas horas, aumentou a taxa de reação acrossômica em relação ao controle (31,1±2,78 vs 23,4±2,65) em Bos taurus. A adição de L-arginina (50 mM) ao meio de FIV (experimento 2), tanto em Bos taurus quanto em Bos indicus, diminuiu as taxas de clivagem (78,7±2,17 vs 65,7±9,32; 72,7±3,36 vs 45±7,12; respectivamente) e blastocisto (39,4±3,78 vs 15,2±6,12; 39,4±4,39 vs 16±8,54; respectivamente) em relação ao controle. Sendo assim, observou-se que a L-arginina aumentou a taxa de reação acrossômica em Bos taurus, porém reduziu as taxas de clivagem e blastocistos em ambos os touros, sem influenciar na qualidade do embrião.
Acesso aberto (Open Access)
Utilização de derivado progesterônico na sincronização do ciclo estral em fêmeas bovinas e bubalinas utilizadas na inseminação artificial em tempo fixo (IATF)
(Universidade Federal do Pará, 2012-05-03) NOGUERA GUEVARA, Samuel Enrique; VALE, William Gomes; http://lattes.cnpq.br/7486151987920142
A utilização de dispositivos intravaginais com progestágeno como o protocolo de sincronização do ciclo estral para inseminação artificial em tempo fixo (IATF) “Pregna Heat-E,” foi utilizado em 219 fêmeas bovinas e 169 fêmeas bubalinas, pertencentes a 6 fazendas comerciais localizadas nos estados Táchira, Carabobo, e Portuguesa, na República Bolivariana da Venezuela com o objetivo de avaliar a taxa de concepção (TC) em vacas bovinas mestiças leiteiras, de corte e vacas bubalinas mestiças leiteiras, assim como em novilhas bovinas mestiças de leite e corte e novilhas bubalinas mestiças leiteiras, e de analisar algumas variáveis que podem interferir na TC, tais como o escore de condição corporal, (ECC), número de partos, intervalo parto tratamento, grau de dificuldade para a IA na Fazenda 1, e nas outras fazendas(2,3,4,5 e 6), avaliou-se somente a taxa de concepção. O manejo das fazendas era de tipo semi-intensivo, com a alimentação baseada principalmente em espécies forrageiras introduzidas em sistema de piquetes rotacionados a campo e suplementação dependendo das necessidades de cada sistema de produção. Na Fazenda 1, localizada no Sul do Lago de Maracaibo, estado Táchira, foram sincronizadas e submetidas a IATF, 22 novilhas bovinas mestiças leiteiras onde foram obtidas TC de 27,2%, igualmente foram submetidas a IATF 20 vacas bovinas mestiças leiteiras no período pós parto (PPP) com uma TC de 30%, enquanto que da mesma forma, 18 novilhas bubalinas mestiças leiteiras foram inseminadas resultando em nenhuma gestação; em 24 vacas bubalinas no (PPP) sincronizadas na época desfavorável (fevereiro, de 2011), foi obtida uma TC de 20,8%. Para na Fazenda 2, localizada na zona Sul do Estado Tachira foi praticada a IATF na época favorável (novembro de 2010) em 78 búfalas mestiças leiterias no PPP obtendo-se uma TC de 34,6%. No caso da Fazenda 3, localizada em Urama, no Estado Carabobo, foram submetidas a IATF 49 vacas bubalinas mestiças no PPP, obtendo-se uma TC de 42,8%; Na Fazenda 4, localizada em Santa Ana, estado Tachira, foi utilizada a IATF, 85 vacas bovinas mestiças leiteiras obtendo-se uma TC de 40%; Na Fazenda 5, localizada no Estado Portuguesa, foram submetidas a IATF 23 vacas bovinas mestiças de dupla aptidão no PPP, observando-se 47,8% de TC; a Fazenda 6 localizada no estado Portuguesa foram submetidas à IATF 20 novilhas mestiças de corte e 49 vacas bovinas mestiças de corte, resultando em uma TC de 55 e 48,8% respectivamente. Ademais na Fazenda 1, foram avaliadas variáveis como TC e número de partos, quando ficou demonstrado melhores TC em vacas bovinas pluriparas quando comparadas com primíparas (40,5 ≥ 4 partos, 28,5% de 2 a 3 partos e 0% para as primiparas), (P=0.4130); com relação a TC e o intervalo parto tratamento pode ser observado que as maiores TC são em vacas entre 60 e 200 dias pós–parto, sendo que vacas com intervalo entre o parto e tratamento superior a 200 dias, a TC foi muito baixa ( 9,0%), (P= 0.0241); com relação a ECC não houve diferença significativa importante pois todos os animais foram sincronizados com ECC maior ou igual a três e a variação entre os animais foi muito reduzida (P= 0.1632); no tocante a o grau de dificuldade para IA, animais com 0 grau de dificuldade para a IA, apresentaram os maiores índices de concepção (44,4 e 31,2%), respectivamente. A utilização do protocolo para IATF, como o “Pregna Heat-E”, pode ser recomendado tanto em bovinos como em bubalinos com resultados satisfatórios, sendo que as TC no caso de bovinos mestiços com maior sangue Bos taurus, em regiões úmidas quentes como o caso da Fazenda 1, observou-se uma queda na TC, o que se pode atribuir a fatores do meio ambiente interferindo de forma negativa nas TC. Da mesma maneira, é importante salientar que as fêmeas bubalinas devem de ser sincronizadas na época favorável, posto que na época desfavorável ocorreu uma queda nas TC nas fêmeas sincronizadas neste período, (20,8% vs 34,6 e 42,8%) respectivamente. No caso da utilização dos protocolos de sincronização pela IATF em novilhas bubalinas, mostrou-se inadequado, com taxas nulas de concepção, provavelmente, por razões anátomo-fisiológicas neste grupo de animais, neste sentido não devem ser incluídas novilhas bubalinas em programas de IATF, com técnicas convencionais. No tocante para o caso das novilhas bovinas o protocolo “Pregna Heat–E” apresenta se como uma alternativa viável, sendo mais eficientes as taxas de concepção em novilhas mestiças de corte quando comparadas com mestiças leiteiras, por ser mais rústicas e melhor adaptadas as condições tropicais do meio ambiente. Os custos do protocolo “Pregna Heat–E” são relativamente similares com outros protocolos com progestagenos, sendo os resultado aceitáveis, podendo este protocolo ser usado junto com outros protocolos de menor custo. O protocolo “Pregna Heat-E” pode ser usado como uma ferramenta viável na sincronização e IATF tanto em bovinos como em bubalinos, sendo que no caso dos bovinos as TC são maiores do que em bubalinos, (40,1 vs 31,9%), (Fisher = 0,9624; P= 0,0212, P<0,05). Portanto, a utilização do protocolo “Pregna Heat-E”, necessita ser melhor estudado em bubalinos para a obtenção de maiores taxas de concepção. Sendo a taxa de concepção geral tanto em bovinos como em bubalinos de 36,5%.