Navegando por Assunto "Leishmaniose cutânea"

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Acesso aberto (Open Access)
Atividade e expressão da metaloprotease GP63 nas espécies Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishmania (Viannia) brasiliensis
(Universidade Federal do Pará, 2021-06) SOARES, Dara da Costa; SILVA, Edilene Oliveira da; http://lattes.cnpq.br/7410116802190343; https://orcid.org/0000-0001-6555-6868
A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença tropical negligenciada de caráter infeccioso causada por protozoários do gênero Leishmania sp. No Brasil, Leishmania (L.) amazonensis e Leishmania (V.) braziliensis são as principais espécies patogênicas. As diferentes cepas e espécies, bem como a resposta imunológica do hospedeiro vertebrado, são pontos-chave no desenvolvimento da doença e, consequentemente, nas diferentes manifestações clínicas causadas por esses protozoários como a leishmaniose cutânea localizada (LCL), leishmaniose cutânea difusa (LCD) e leishmaniose mucocutânea (LMC). Parasitos do gênero Leishmania possuem aprimorados mecanismos com a capacidade de silenciar a resposta microbicida de macrófagos infectados através da ação de fatores de virulência como a glicoproteína 63 (GP63). Esta glicoproteína, que possui um sítio catalítico zinco-dependente, é a principal metaloprotease de superfície da Leishmania e é capaz de modular a resposta imune do hospedeiro vertebrado ao clivar um conjunto amplo de substratos citosólicos. Contudo, devido à necessidade de compreensão da atuação e envolvimento da GP63 nos processos de infecção e diferentes manifestações clínicas, é importante analisar que de que forma esta molécula está presente durante esses processos. Tendo isso em vista, a pergunta experimental deste estudo é se existe diferença na expressão do fator de virulência GP63 entre duas espécies causadoras de LTA, Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishmania (Viannia) braziliensis que causam diferentes manifestações clínicas com a hipótese de que existe diferença na expressão deste fator de virulência nas espécies analisadas. Portanto, o objetivo deste trabalho foi analisar a expressão e atividade da GP63 nas espécies Leishmania (L.) amazonensis e Leishmania (V.) braziliensis, que possuem maior relevância para o acometimento da LTA. A atividade da GP63 foi analisada utilizando formas promastigotas na fase estacionária (7 dias de cultivo) e foram submetidas à análise do perfil proteolítico através da DQ-gelatin (10μg/ml) em fluorímetro (VICTOR Multilabel Plate Reader X) com comprimento de onda de 480-520 nm e por zimografia em gel contendo 0,1% de gelatina como substrato. A expressão da GP63 foi analisada por Western blot utilizando anticorpo anti-GP63. A imunomarcação e quantificação da proteína GP63 foram analisadas por imunofluorescência indireta. Este trabalho mostrou pela primeira vez que a espécie Leishmania (L.) amazonensis apresenta maior expressão da glicoproteína 63 kDa em comparação com a espécie Leishmania (V.) braziliensis. A maior expressão desta protease também foi acompanhada do aumento da atividade gelatinolítica nas espécies analisadas. Esses resultados permitem sugerir uma correlação no envolvimento desse fator de virulência entre as manifestações clínicas que são causadas por essas duas espécies analisadas neste trabalho.
Acesso aberto (Open Access)
Avaliação da susceptibilidade de camundongos BALB/c e Swiss, hamster e Proechimys roberti à infecção por Leishmania (Viannia) Naiffi e Leishmania (Viannia) Lindenbergi
(Universidade Federal do Pará, 2005) SODRÉ, Roberta Nice Salgado; ISHIKAWA, Edna Aoba Yassui; http://lattes.cnpq.br/3074963539505872
Leishmania (Viannia) naiffi e Leishmania (Viannia) lindenbergi são espécies causadoras da leishmaniose cutânea na Amazônia e apresentam grande similaridade no seu perfil isoenzimático, anticorpos monoclonais e produção de infecção inaparente em hamsters. O fato de não se ter um modelo experimental altamente suscetível à infecção por L. (V.) naiffi e L. (V.) lindenbergi, o objetivo deste estudo foi avaliar a susceptibilidade de camundongos BALB/c e Swiss, hamster e Proechimys roberti à infecção por essas duas espécies. Foram preparados inóculos com glândulas salivares e sem glândulas, associados às formas promastigotas das duas espécies de Leishmania. Doze animais de cada espécie foram divididos em quatro grupos (machos e fêmeas inoculados com glândulas salivares e machos e fêmeas sem glândulas salivares). Todos foram inoculados intradermicamente na face dorsal das duas patas traseiras e foram observados durante 90 dias. No período de 30, 60 e 90 dias pós-inoculação, os animais foram sacrificados e diferentes fragmentos de pele do local de inoculação foram divididos e utilizados na cultura in vitro, exame microscópico direto e reação em cadeia da polimerase (PCR). Não foi possível observar lesões nos animais inoculados com L. (V.) naiffi e L. (V.) lindenbergi tanto na presença ou ausência de glândulas salivares. Assim como, formas amastigotas durante 30, 60 e 90 dias após a inoculação. Na cultura, todos os animais inoculados com L. (V.) lindenbergi não desenvolveram formas promastigotas. Por outro lado, todos os grupos de camundongos BALB/c inoculados com L. (V.) naiffi apresentaram positividade quando sacrificados com 30 dias após inoculação e até 90 dias nos machos inoculados com glândulas salivares e fêmeas inoculadas sem glândulas salivares. A PCR apresentou baixa sensibilidade comparada à cultura. Desse modo, concluímos que L. (V.) naiffi e L.(V.) lindenbergi são espécies que apresentam baixa infectividade e nenhum dos animais utilizados no estudo podem ser considerados modelo experimental altamente susceptíveis à infecção por essas duas espécies.
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Caracterização isoenzimática e por anticorpos monoclonais dos agentes da leismaniose tegumentar americana (LTA) na mesorregião do Baixo Amazonas, estado do Pará, Brasil
(Universidade Federal do Pará, 2003) JENNINGS, Yara Lúcia Lins; SILVEIRA, Fernando Tobias; http://lattes.cnpq.br/8106158306299969
Existe uma diversidade de espécies de Leishmania prevalentes na região Amazônica associadas à LTA configurando a etiologia múltipla da doença e, apesar do conhecimento da elevada ocorrência desta protozoose na Mesorregião do Baixo Amazonas, à oeste do Estado do Pará, quase nada era sabido sobre os agentes etiológicos da doença na referida área. Nesse sentido, o presente trabalho propôs-se a caracterizar por eletroforese de isoenzimas as amostras de Leishmania isoladas de pacientes procedentes da Mesorregião do baixo Amazonas, verificando a existência da correlação geográfica das espécies encontradas com a sua distribuição regional previamente conhecida, e ainda, verificando a presença de variação intraespecífica. A caracterização das 43 amostras de Leishmania foi feita por eletroforese em gel de amido utilizando sete sistemas enzimáticos (6PGDH, PGM, G6PD, MPI, GPI, ASAT E ALAT), comparando seus perfis eletroforéticos com os perfis das sete cepas-referência das espécies conhecidas da região. As amostras foram testadas previamente por imunofluorescência indireta com o uso de um painel com 23 anticorpos monoclonais (sistema biotina-avidina) apenas como uma triagem. A caracterização isoenzimática das amostras permitiu o seguinte resultado: 11 (25,28%) amostras de L. (V) braziliensis, 20 (46,50%) de L.(V) guyanensis, 2 (4,60%) de L.(L.) amazonensis, 4 (9,30%) de L.(V) shawi e 6 (13,95%) de L.(V) lainsoni. A eletroforese isoenzimática apresentou elevado poder discriminatório para a identificação das amostras estudadas, permitindo concluir que esta técnica representa uma importante ferramenta para a caracterização dos parasitos do gênero Leishmania. Nas cepas de L. (V) braziliensis observou-se pela primeira vez na Mesorregião do Baixo Amazonas a ocorrência de variação intraespecífica revelada pela presença de três serodemas. Nas cepas de L. (V) guyanensis observou-se a presença de duas variantes, uma que apresentou reatividade com o monoclonal B 19 (espécie-específico), porém com variação nas enzimas 6PGDH e PGM, e a Segunda, sem reatividade para este monoclonal e com perfis eletroforéticos semelhantes ao da cepa-referência L. (V) guyanensis especialmente nas enzimas 6PGDH, porém com tribandas, e na PGM, consideradas os melhores marcadores enzimáticos pelo seu elevado poder discriminatório. Dessa forma, descreveu-se pela primeira vez a ocorrência de diferentes espécies de Leishmania dermotrópicas na Mesorregião do Baixo Amazonas, as quais já tem registro na região norte do Brasil, sugerindo a transmissão simpátrica das espécies encontradas na referida área estudada.
Acesso aberto (Open Access)
Efeito in vitro e in vivo do 5-hidroxi-2-hidroximetil-gama-pirona durante a infecção por Leishmania (Leishmania) amazonensis
(Universidade Federal do Pará, 2013-05-27) RODRIGUES, Ana Paula Drummond; SILVA, Edilene Oliveira da; http://lattes.cnpq.br/7410116802190343
As leishmanioses são um grupo de doenças infecciosas distribuídas mundialmente. A quimioterapia é o tratamento mais eficaz para a doença; apesar do grande número de drogas antileishmania disponíveis, são usualmente tóxicas, caras e requerem um longo período de tratamento. Portanto, torna-se necessária a busca de novas substâncias que sejam capazes de atuar sobre o protozoário sem causar danos ao hospedeiro, que tenham uma via de administração não invasiva e que, ainda, sejam viáveis economicamente. O ácido kójico, ou 5-hidroxi-2-hidroximetil-γ-pirona (HMP), é conhecido por inibir a enzima tirosinase no processo de produção da melanina, sendo extensivamente utilizado em cosméticos e também como tratamento tópico para melasma, não havendo citotoxicidade em humanos; entretanto, o potencial do HMP como agente antileishmania não é conhecido. O presente estudo analisou o efeito deste bioproduto em infecções por L. amazonensis in vitro e in vivo. O HMP promoveu a diminuição do crescimento de promastigotas e amastigotas em 62% (IC50 34μg/mL) e 79% (IC50 27,84 μg/mL) in vitro, respectivamente. A análise ultraestrutural de ambas as formas evolutivas tratadas com 50 μg/mL do HMP apresentaram corpos vesiculares no interior da bolsa flagelar, induziu uma intensa vacuolização intracelular bem como alterações mitocondriais. O estudo in vitro também demonstrou que o HMP foi capaz de reverter o efeito inibitório causado pela L. amazonensis no que diz respeito à produção de radicais de oxigênio. A análise histopatológica de lesões proveniente de animais submetidos ao tratamento tópico com o HMP demonstrou que o tecido apresentou um intenso processo de cicatrização. Além disso, fibras colágenas foram encontradas de maneira organizada no local da infecção de animais tratados, com um pequeno infiltrado celular e diminuição do número de parasitos. Tendo em vista a ação seletiva do HMP in vitro, o processo de ativação da célula hospedeira pelo bioproduto e a diminuição do número de parasitos observados durante o tratamento com a pomada, e pelo fato do HMP ser amplamente utilizado como agente antimelasma em humanos, esse metabólito pode ser promissor como tratamento tópico contra a Leishmaniose cutânea e apresentando grande potencial como agente leishmanicida.