Navegando por Assunto "Resposta imune"

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Acesso aberto (Open Access)
Atividade e expressão da metaloprotease GP63 nas espécies Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishmania (Viannia) brasiliensis
(Universidade Federal do Pará, 2021-06) SOARES, Dara da Costa; SILVA, Edilene Oliveira da; http://lattes.cnpq.br/7410116802190343; https://orcid.org/0000-0001-6555-6868
A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença tropical negligenciada de caráter infeccioso causada por protozoários do gênero Leishmania sp. No Brasil, Leishmania (L.) amazonensis e Leishmania (V.) braziliensis são as principais espécies patogênicas. As diferentes cepas e espécies, bem como a resposta imunológica do hospedeiro vertebrado, são pontos-chave no desenvolvimento da doença e, consequentemente, nas diferentes manifestações clínicas causadas por esses protozoários como a leishmaniose cutânea localizada (LCL), leishmaniose cutânea difusa (LCD) e leishmaniose mucocutânea (LMC). Parasitos do gênero Leishmania possuem aprimorados mecanismos com a capacidade de silenciar a resposta microbicida de macrófagos infectados através da ação de fatores de virulência como a glicoproteína 63 (GP63). Esta glicoproteína, que possui um sítio catalítico zinco-dependente, é a principal metaloprotease de superfície da Leishmania e é capaz de modular a resposta imune do hospedeiro vertebrado ao clivar um conjunto amplo de substratos citosólicos. Contudo, devido à necessidade de compreensão da atuação e envolvimento da GP63 nos processos de infecção e diferentes manifestações clínicas, é importante analisar que de que forma esta molécula está presente durante esses processos. Tendo isso em vista, a pergunta experimental deste estudo é se existe diferença na expressão do fator de virulência GP63 entre duas espécies causadoras de LTA, Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishmania (Viannia) braziliensis que causam diferentes manifestações clínicas com a hipótese de que existe diferença na expressão deste fator de virulência nas espécies analisadas. Portanto, o objetivo deste trabalho foi analisar a expressão e atividade da GP63 nas espécies Leishmania (L.) amazonensis e Leishmania (V.) braziliensis, que possuem maior relevância para o acometimento da LTA. A atividade da GP63 foi analisada utilizando formas promastigotas na fase estacionária (7 dias de cultivo) e foram submetidas à análise do perfil proteolítico através da DQ-gelatin (10μg/ml) em fluorímetro (VICTOR Multilabel Plate Reader X) com comprimento de onda de 480-520 nm e por zimografia em gel contendo 0,1% de gelatina como substrato. A expressão da GP63 foi analisada por Western blot utilizando anticorpo anti-GP63. A imunomarcação e quantificação da proteína GP63 foram analisadas por imunofluorescência indireta. Este trabalho mostrou pela primeira vez que a espécie Leishmania (L.) amazonensis apresenta maior expressão da glicoproteína 63 kDa em comparação com a espécie Leishmania (V.) braziliensis. A maior expressão desta protease também foi acompanhada do aumento da atividade gelatinolítica nas espécies analisadas. Esses resultados permitem sugerir uma correlação no envolvimento desse fator de virulência entre as manifestações clínicas que são causadas por essas duas espécies analisadas neste trabalho.
Acesso aberto (Open Access)
Caracterização da resposta imune citocínica na infecção humana pelo vírus oropouche e sua relação com o padrão de soroconversão e a presença de sintomas
(Universidade Federal do Pará, 2011-12-19) OLIVEIRA, Euzébio de; VASCONCELOS, Pedro Fernando da Costa; http://lattes.cnpq.br/0973550817356564
A tese aqui apresentada trata-se do primeiro estudo em nível mundial que pesquisa e caracteriza a resposta imune citocínica em infecções humanas pelo Orthobunyavirus Oropuche. Como metodologia para o alcance dos objetivos aqui apresentados foi utilizado um total de 320 amostras de soros humanos, onde 60 destas foram provenientes de Banco de Sangue (Controle negativo) e 260 foram obtidas mediante dois surtos do Vírus Oropouche nos Estados do Pará e Amapá (Brasil), sendo estas últimas divididas em oito subgrupos para obtenção dos dados com exatidão. Nas amostras coletadas foram realizadas análises dos dados clínicos/sintomatologia através dos prontuários, dados sorológicos através da titulação de anticorpos por Inibição da Hemaglutinação (IgM/IgG) e detecção do nível de citocinas plasmáticas por citometria de fluxo a qual permitiu a descrição técnica da dosagem de citocinas possibilitando ainda a análise de frequência de baixos e altos produtores de citocina. Os dados obtidos permitiram observar as variáveis e o comportamento das assinaturas de citocinas expressas pelos pacientes mediante a confirmação sorológica do vírus, bem como o comportamento destes analitos séricos quando da presença de sintomas específicos como febre, calafrios, cefaléia e tontura, permitindo assim que se chegasse à conclusão que a) existe um padrão na síntese de citocinas pró-inflamatórias e reguladoras; b) observa-se um balanço no perfil da resposta imune entre citocinas pró-inflamatórias (Th1) e moduladoras (Th17); c) a infecção pelo Vírus Oropouche altera a produção das citocinas nos indivíduos; d) os resultados mostram também que ao comparar os indivíduos Não respondedores com os Respondedores precoces, houve aumento da IL-1β e diminuição da IL-12; Não respondedores com Respondedores tardios, houve diminuição da IL-8, e aumento da IFN-α, IL-23 e IL-17; Não respondedores comparados com Respondedores precoces ocorreram o aumento de IL-4 e IFN-; Já quando comparado Respondedores precoces e respondedores tardios houve diminuição de IFN-α e IL-6; Respondedores precoces de forma geral apresentaram diminuição da IL-10 e Respondedores tardios apresentaram aumento da IL-5; e) Os resultados mostram ainda a expressão de IL-5 em pacientes que manifestaram os sintomas específicos para a infecção pelo Oropouche (febre, calafrios, cefaléia e tontura), sugerindo este sinal estar associado diretamente à patogênese do vírus; f) há a necessidade da complementação desta pesquisa com mais estudos como àqueles relacionados com a expressão de quimiocinas.
Acesso aberto (Open Access)
Estudo morfológico e imunológico da encefalite induzida pelo vírus juruaçá em modelo murino
(Universidade Federal do Pará, 2013-10-08) FERREIRA, Natalie Chaves; DINIZ JUNIOR, José Antônio Picanço; http://lattes.cnpq.br/1897655177251738
Muitos estudos têm sido realizados para o entendimento da neuropatogênese das encefalites virais a partir de trabalhos experimentais, porém, nenhum estudo experimental foi dedicado à compreensão da neuropatogênese de membros da família Picornaviridae isolados de morcegos na região amazônica. O vírus Juruaçá, um desses agentes, parcialmente caracterizado como membro da família Picornaviridae por Araújo e colaboradores (2006), causou lesões no encéfalo de camundongos neonatos com presença de gliose reativa, apesar de não provocar efeito citopático (ECP) em cultivos primários de células do sistema nervoso central (SNC), sugerindo que este agente viral seja responsável pela morte dos animais devido a uma intensa resposta imune. O objetivo desse trabalho foi investigar a resposta imune no SNC e alterações celulares causadas pelo vírus Juruaçá em camundongos albinos da linhagem BALB/c neonatos a partir de análises histopatológicas, de ativação microglial e da expressão de citocinas, óxido nítrico (NO) e espécies reativas de oxigênio (ROS). Para tanto, foram realizados processamento de amostras para histopatologia, ensaios imunoenzimáticos, imunohistoquímicos e de imunofluorescência, além de testes para quantificação de NO e ROS e análises estatísticas. Nossos resultados demonstraram que o vírus Juruaçá induz lesões por todo o encéfalo, com maior intensidade no parênquima cortical. Os testes imunohistoquímicos demonstraram a presença de antígenos virais e de micróglias reativas distribuídos por todo o encéfalo e região anterior da medula espinhal. Micróglias com aspecto ameboide, demonstrando intensa ativação, foram observadas principalmente no córtex cerebral, bulbo olfatório, núcleo olfatório anterior, prosencéfalo e diencéfalo próximo ao ventrículo lateral. A produção das citocinas anti-inflamatórias (IL-10, IL-4) diminuiu ao longo do tempo, enquanto que as pró-inflamatórias (IL-12, IL-6, IL-1β, TNF-α, IFN-γ) aumentaram significativamente a partir do 8º dia. Os ensaios para detecção de ROS demonstraram grande produção de radicais superóxido desde o 4º dia, já a produção de NO foi sempre menor nos animais infectados. Provavelmente, a ativação das células gliais, principalmente micróglias, e consequente produção de citocinas pró-inflamatórias e ROS promoveram uma ação devastadora sobre as células do SNC, que coincide com a intensificação dos sinais clínicos. Diante do exposto, ficou evidente que os nossos resultados indicam que o vírus Juruaçá é responsável por uma doença de cunho inflamatório que leva a óbito 100% de camundongos neonatos infectados.
Acesso aberto (Open Access)
Resposta imune humoral de bubalinos (Bubalus bubalis) vacinados pela cepa B19 de Brucella abortus
(Universidade Federal do Pará, 2013-08-31) PEREIRA, Ana Patrícia Moreira; CASSEB, Alexandre do Rosário; http://lattes.cnpq.br/6525374874057337; PEREIRA, Washington Luiz Assunção; http://lattes.cnpq.br/9266281009742277
A brucelose está distribuída em todo território nacional, com maior prevalência para a espécie Brucella abortus que apesar de ser endêmica, apresenta-se de forma heterogênea entre as diferentes regiões do Brasil. O presente estudo tem por objetivo avaliar a resposta imune humoral de bezerras bubalinas criadas na Mesorregião do Médio Amazonas, vacinadas com a cepa B19 de B. abortus na idade preconizada pelo Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose (PNCEBT). Foram selecionadas e acompanhadas 36 fêmeas (grupo teste) e 6 machos (grupo controle) com idades entre 3-8 meses. No dia 0 foi coletado sangue de todos os animais, em seguida todas as fêmeas receberam vacina comercial com amostra B19 em dose padrão conforme orienta o PNCEBT, com posteriores coletas de sangue realizadas aos 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 330, 360 e 390 dias. Os soros sanguíneos foram avaliados pelo soro aglutinação das provas de triagem: Antígeno Acidificado Tamponado - AAT e pela prova confirmatória: 2 Mercaptoetanol - 2ME. Os resultados obtidos para todas as amostras coletas no dia 0 apresentaram resultado negativo na reação. Aos 30 e 60 dias todas as fêmeas apresentaram 100% de reação na prova AAT e titulação de 1:200, iniciando o declínio da titulação aos 90 dias nas duas provas. Aos 210 dias as fêmeas ainda reagentes apresentaram resultados similares nas duas provas, tendo apenas um animal se mantido reativo nas duas provas até 360 dias e, somente aos 390 dias 100% das fêmeas obtiveram reação negativa nas duas provas, durante todo o experimento os machos foram não reativos. Assim, pela avaliação dos resultados, a vacinação mostrou-se eficaz para a imunização, sendo uma ferramenta importante na profilaxia da brucelose na espécie estudada, bem como as provas aplicadas para o diagnostico dessa enfermidade em búfalos a nível regional.