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Tipo: Dissertação
Data do documento: 3-Nov-2020
Autor(es): CASTRO, Ana Laura Gadelha
Primeiro(a) Orientador(a): DOLABELA, Maria Fâni
Primeiro(a) coorientador(a): MONTEIRO, Marta Chagas
Título: Estudos químico-farmacêuticos, atividade antitumoral e mutagênica de Eleutherine plicata. Herb.
Agência de fomento: 
Citar como: CASTRO, Ana Laura Gadelha. Estudos químico-farmacêuticos, atividade antitumoral e mutagênica de Eleutherine plicata. Herb.. Orientadora: Maria Fâni Dolabela. 2020. 104 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Universidade Federal do Pará, Instituto de Ciências da Saúde, Belém, 2020. Disponível em: http://repositorio.ufpa.br:8080/jspui/handle/2011/14433. Acesso em:.
Resumo: As naftoquinonas têm sido relacionadas a atividade antitumoral, entretanto estes podem causar danos ao DNA e ser mutagênicos. Algumas destas, como por exemplos, a isoeleuterina e eleuterina, presentes em Eleutherine plicata Herb. carecem de estudos de mutagenicidade e atividade antitumoral. O presente trabalho avaliou o potencial antitumoral do extrato etanólicos de E. plicata (EEEP), fração em que se encontrava as quinonas (Fração diclorometano- FDEP) e o potencial genotóxico relacionado a estas substâncias. Para compreender se o fracionamento influencia na atividade antitumoral, foram obtidos o EEEP por maceração dos bulbos, este foi fracionado sobre refluxo e obteve-se a FDEP e esta fracionada em coluna cromatográfica aberta, sendo isoladas a eleuterina, isoeleuterina e o eleuterol. Ainda foram realizados os seguintes estudos químico farmacêuticos: in sílico toxicidade e farmacocinética (PreADMET), docking e dinâmica. A atividade antitumoral foi avaliada através do efeito citotóxico em linhagem de célula tumoral (câncer bucal-SCC-9) e linhagem de célula normal (queratinócitos humanos-HaCaT), ensaio tridimensional em modelo esferoide e migração celular nas mesmas linhagens. A genotoxcidade e mutagenicidade foram avaliadas no modelo de Allium cepa, sendo os resultados dos compostos isolados relacionados aos obtidos nos estudos in sílico. Além das natoquinonas isoeleuterina e eleuterina, o eleuterol foi isolado de FDEP, a avaliação in sílico demonstrou perfis farmacocinéticos semelhantes entre estes compostos. Na avaliação da atividades antitumoral observou-se que o fracionamento de EEEP contribui negativamente para a atividade, sendo o EEEP (SCC09: CI50= 12,87 ± 0,86 e HaCaT: 28,81 ± 1,82µg/mL) o mais promissor e com maior índice de seletividade para a célula tumoral, interferindo na velocidade e direcionalidade da migração tumoral. Tentando compreender este resultado, avaliou-se a capacidade de ligação das naftoquinonas a Topoisomerase II (TOPII) confirmando que os mesmos se ligam na bolsa desta, estabilizando o complexo DNA-TOP II. Em contrapartida, a eleuterina mostrou-se mais genotóxica, aumentando o índice de mitose, de aberrações, sendo observados micronúcleo, broto e ponte na fase de metáfase. Entretanto, não foi possível diferenciar a toxicidade da eleuterina e isoleuterina nos estudos in sílico (Algae, Daphinia, peixes e mutagenicidade), sendo obtidos resultados semelhantes. Em síntese, o EEEP é promissor como agente citotóxico em células tumorais e na prevenção das metástases de câncer escamoso de boca. Em relação as naftoquinonas, a isoleuterina, devido o menor potencial tóxico e capacidade de estabilização do complexo DNA-TOP II, merece ser avaliada em outras linhagens tumorais.
Abstract: Naphthoquinones have been linked to antitumor activity; however, they can cause DNA damage and be mutagenic. Some of these as the isoeleutherine and eleutherine, present in Eleutherine plicata Herb., do not have studies of mutagenicity and antitumor activity. This study evaluated the antitumor potential of the ethanolic extracts of E. plicata (EEEP), the fraction in which the quinones were found (Fraction dichloromethane-FDEP) and the genotoxic potential related to these substances. For understanding whether fractionation influences antitumor activity, EEEP was obtained by macerating the bulbs, it was fractionated under reflux and FDEP was obtained and fractionated in an open chromatographic column, resulting in the isolatation of eleutherine, isoeleutherine and eleutherol. Chemical-pharmaceutical studies were carried out: silica toxicity and pharmacokinetics (PreADMET), docking and dynamics. The antitumor activity was evaluated through the cytotoxicity in tumor cell line (oral cancer-SCC-9) and normal cell line (human keratinocytes-HaCaT), three-dimensional assay in spheroid model and cell migration in the same lines. Genotoxicity and mutagenicity were evaluated in Allium cepa model, the results of the isolated compounds were similar to those obtained in silico studies. In addition to the isoeleutherine and eleutherine, eleuterol was isolated from FDEP, the silica evaluation demonstrated similar pharmacokinetic profiles between these compounds. In the evaluation of anti-tumor activities, the EEEP fractionation contributed negatively to the activity, with EEEP (SCC09: IC50 = 12.87 ± 0.86 and HaCaT: 28.81 ± 1.82µg/mL) being the most promising with higher selectivity index for the tumor cell, interfering in the speed and directionality of tumor migration. Trying to understand this result, the capacity of naphthoquinones bind to Topoisomerase II (TOPII) was evaluated, confirming that they bind in its pouch, stabilizing the DNA-TOP II complex. In contrast, eleutherine proved to be more genotoxic, increasing the rate of mitosis, of aberrations, with micronucleus, bud and bridge being observed in the metaphase phase. However, it was not possible to differentiate the toxicity of eleutherine and isoleutherine in silico studies (Algae, Daphinia, fish and mutagenicity), obtaining similar results. In summary, EEEP is promising as a cytotoxic agent in tumor cells, and in the prevention of squamous cancer of the mouth. In relation to naphthoquinones, isoleutherine, due to its lower toxic potential and stabilization capacity of the DNA-TOP II complex, needs to be evaluated in other tumor strains.
Palavras-chave: Eleutherine plicata
Naftoquinonas
Atividade antitumoral
Toxicidade
Estabilização do complexo DNA TOP II
Naphthoquinones
Antitumor activity
Toxicity
Stabilization of the DNA TOP II complex
Área de Concentração: FÁRMACOS E MEDICAMENTOS
Linha de Pesquisa: AVALIAÇÃO BIOLÓGICA DE PRINCÍPIOS ATIVOS, NATURAIS E SINTÉTICOS
CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::FARMACOLOGIA
País: Brasil
Instituição: Universidade Federal do Pará
Sigla da Instituição: UFPA
Instituto: Instituto de Ciências da Saúde
Programa: Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
Fonte: 1 CD-ROM
Aparece nas coleções:Dissertações em Ciências Farmacêuticas (Mestrado) - PPGCF/ICS

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