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https://repositorio.ufpa.br/jspui/handle/2011/15060
Tipo: | Dissertação |
Data do documento: | Jun-2021 |
Autor(es): | SOARES, Dara da Costa |
Primeiro(a) Orientador(a): | SILVA, Edilene Oliveira da |
Título: | Atividade e expressão da metaloprotease GP63 nas espécies Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishmania (Viannia) brasiliensis |
Citar como: | SOARES, Dara da Costa. Atividade e expressão da metaloprotease Gp63 nas espécies Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishamania (Viannia) braziliensis. Orientadora: Edilene Oliveira da Silva. 2021. 61 f. Dissertação (Mestrado em Neurociências e Biologia Celular) - Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal do Pará, Belém, 2022. Disponível em: http://repositorio.ufpa.br:8080/jspui/handle/2011/15060. Acesso em:. |
Resumo: | A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença tropical negligenciada de caráter infeccioso causada por protozoários do gênero Leishmania sp. No Brasil, Leishmania (L.) amazonensis e Leishmania (V.) braziliensis são as principais espécies patogênicas. As diferentes cepas e espécies, bem como a resposta imunológica do hospedeiro vertebrado, são pontos-chave no desenvolvimento da doença e, consequentemente, nas diferentes manifestações clínicas causadas por esses protozoários como a leishmaniose cutânea localizada (LCL), leishmaniose cutânea difusa (LCD) e leishmaniose mucocutânea (LMC). Parasitos do gênero Leishmania possuem aprimorados mecanismos com a capacidade de silenciar a resposta microbicida de macrófagos infectados através da ação de fatores de virulência como a glicoproteína 63 (GP63). Esta glicoproteína, que possui um sítio catalítico zinco-dependente, é a principal metaloprotease de superfície da Leishmania e é capaz de modular a resposta imune do hospedeiro vertebrado ao clivar um conjunto amplo de substratos citosólicos. Contudo, devido à necessidade de compreensão da atuação e envolvimento da GP63 nos processos de infecção e diferentes manifestações clínicas, é importante analisar que de que forma esta molécula está presente durante esses processos. Tendo isso em vista, a pergunta experimental deste estudo é se existe diferença na expressão do fator de virulência GP63 entre duas espécies causadoras de LTA, Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishmania (Viannia) braziliensis que causam diferentes manifestações clínicas com a hipótese de que existe diferença na expressão deste fator de virulência nas espécies analisadas. Portanto, o objetivo deste trabalho foi analisar a expressão e atividade da GP63 nas espécies Leishmania (L.) amazonensis e Leishmania (V.) braziliensis, que possuem maior relevância para o acometimento da LTA. A atividade da GP63 foi analisada utilizando formas promastigotas na fase estacionária (7 dias de cultivo) e foram submetidas à análise do perfil proteolítico através da DQ-gelatin (10μg/ml) em fluorímetro (VICTOR Multilabel Plate Reader X) com comprimento de onda de 480-520 nm e por zimografia em gel contendo 0,1% de gelatina como substrato. A expressão da GP63 foi analisada por Western blot utilizando anticorpo anti-GP63. A imunomarcação e quantificação da proteína GP63 foram analisadas por imunofluorescência indireta. Este trabalho mostrou pela primeira vez que a espécie Leishmania (L.) amazonensis apresenta maior expressão da glicoproteína 63 kDa em comparação com a espécie Leishmania (V.) braziliensis. A maior expressão desta protease também foi acompanhada do aumento da atividade gelatinolítica nas espécies analisadas. Esses resultados permitem sugerir uma correlação no envolvimento desse fator de virulência entre as manifestações clínicas que são causadas por essas duas espécies analisadas neste trabalho. |
Abstract: | The american cutaneous leishmaniasis (ATL) is a neglected tropical disease caused by protozoa of the genus Leishmania sp. In Brazil, Leishmania (L.) amazonensis and Leishmania (V.) braziliensis are the main pathogenic species. The different strains and species, as well as the immune response of the vertebrate host, are key points in the development of the disease and, consequently, in the different clinical manifestations caused by these protozoa such as localized cutaneous leishmaniasis (LCL), diffuse cutaneous leishmaniasis (LCD) and mucocutaneous leishmaniasis (CML). Leishmania parasites have improved mechanisms with the ability to silence the microbicidal response of infected macrophages through the action of virulence factors such as glycoprotein 63 (GP63). This glycoprotein, which has a zinc- dependent catalytic site, is the main surface metalloprotease of Leishmania and is able to modulate the vertebrate host's immune response by cleaving a wide set of cytosolic substrates. However, due to the need to understand the role and involvement of GP63 in infection processes and different clinical manifestations, it is important to analyze how this molecule is present during these processes. In view of this, the hypothesis of this study is whether there is a difference in the expression of the virulence factor GP63 between two ATL-causing species, Leishmania (Leishmania) amazonensis and Leishmania (Viannia) braziliensis, which cause different clinical manifestations. Therefore, the objective of this work was to analyze the expression and activity of GP63 in the species Leishmania (L.) amazonensis and Leishmania (V.) braziliensis, which are more relevant to the involvement of ATL. The activity of GP63 was analyzed using promastigote forms in the stationary phase (7 days of culture) and they were submitted to analysis of the proteolytic profile through DQ-gelatin (10μg / ml) in fluorimeter (VICTOR Multilabel Plate Reader X) with wavelength of 480-520 nm and by zymography gel containing 0.1% gelatin as substrate. The expression of GP63 was analyzed by Western blot using anti-GP63 antibody. The immunostaining and quantification of the GP63 protein were analyzed by indirect immunofluorescence. This work showed for the first time that the species Leishmania (L.) amazonensis shows greater expression of the glycoprotein 63 kDa compared to the species Leishmania (V.) braziliensis. The greater expression of this protease was also accompanied by an increase in gelatinolytic activity in the analyzed species. These results allow suggesting a correlation in the involvement of this virulence factor between the clinical manifestations that are caused by these two species analyzed in this work. |
Palavras-chave: | Leishmaniose cutânea Leishmaniose americana Leishmania mexicana Leishmania brasiliensis Doenças parasitárias Glicoproteínas Resposta imune Infecções por protozoários Metaloproteases Interações entre hospedeiros e micorganismos |
Área de Concentração: | BIOLOGIA CELULAR |
Linha de Pesquisa: | MICROORGANISMOS PATOGÊNICOS |
CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS |
País: | Brasil |
Instituição: | Universidade Federal do Pará |
Sigla da Instituição: | UFPA |
Instituto: | Instituto de Ciências Biológicas |
Programa: | Programa de Pós-Graduação em Neurociências e Biologia Celular |
Tipo de Acesso: | Acesso Aberto Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil |
Fonte: | Disponível na internet via correio eletrônico: biblicb.420@gmail.com |
Aparece nas coleções: | Dissertações em Neurociências e Biologia Celular (Mestrado) - PPGNBC/ICB |
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