Método baseado me cromatografia líquida de alta eficiência para analisar a atividade dos transportadores de GABA no sistema nervoso central

Os GATs são os principais transportadores de GABA no sistema nervoso central e alterações em sua atividade estão envolvidas em várias doenças neurológicas, incluindo retinopatias. O presente estudo descreve um método eficiente utilizando cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à detecção por fluorescência para determinação da atividade dos GATs em preparações de retina. Explants de retina foram incubadas em concentrações conhecidas de GABA (50-1000 μM) por 30 minutos, e os níveis do neurotransmissor derivado de o-ftaldeído (OPA) no meio de incubação foram mensurados. Ao avaliar a diferença entre as concentrações inicial e final de GABA no meio ( Δ𝐺𝑎𝑏𝑎 = [𝐺𝑎𝑏𝑎] 𝑡_0 − [𝐺𝑎𝑏𝑎] 𝑡_𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙), um mecanismo de captação saturável foi caracterizado ( Km e Vmáx de 382,4 μM e 34 nmol/mg proteína/minuto, respectivamente). Tal mecanismo foi amplamente dependente do Na+ e de temperatura, reiterando que o mecanismo de diminuição da concentração é de fato captado por transportadores de alta afinidade. Somado a isso, nossos resultados também demonstraram que o ácido nipecótico (um substrato dos transportadores GAT) inibiu a captação de GABA em preparações retinianas, demonstrando uma elevada especificidade dessa metodologia. No geral, o presente estudo caracteriza um método alternativo e altamente sensível para avaliar a atividade do GAT no SNC.