Use este identificador para citar ou linkar para este item: https://repositorio.ufpa.br/jspui/handle/2011/16932
Tipo: Tese
Data do documento: Out-2023
Autor(es): BOUTH, Raquel Carvalho
Primeiro(a) Orientador(a): SALGADO, Claudio Guedes
Primeiro(a) coorientador(a): SILVA, Moises Batista da
Título: O papel da biologia molecular no diagnóstico, epidemiologia molecular e perfil de sensibilidade de cepas de M. leprae em região endêmica da Amazônia Brasileira
Agência de fomento: 
Citar como: BOUTH, Raquel Carvalho. O papel da biologia molecular no diagnóstico, epidemiologia molecular e perfil de sensibilidade de cepas de M. leprae em região endêmica da Amazônia Brasileira. Orientador: Claudio Guedes Salgado.; Coorientador: Moises Batista da Silva. 2023. 105 f. Tese (Mestrado em Neurociências Biologia Celular) - Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal do Pará, Belém, 2025. Disponível em: https://repositorio.ufpa.br/jspui/handle/2011/16932. Acesso em:.
Resumo: A hanseníase é uma doença crônica, incapacitante e de difícil diagnóstico, principalmente nas formas clínicas não clássicas. O objetivo deste estudo foi identificar o marcador laboratorial que apresente maior sensibilidade e especificidade para o diagnóstico, conhecer geneticamente as cepas de M. leprae circulantes no Estado do Pará e avaliar a realidade da droga-resistência na região. Para isso, uma equipe multiprofissional avaliou 833 indivíduos em diferentes estratégias na URE Dr. Marcello Candia, e em 14 municípios do Pará. Todos os indivíduos foram avaliados clinicamente, e coletadas amostras biológicas para análise comparativa dos resultados de baciloscopia de raspado intradérmico, detecção molecular do bacilo pela pesquisa da região RLEP por qPCR em lóbulos auriculares, titulação de anticorpos IgM Anti-PGL-I, e biópsia de pele em quem tinha lesão para exame histopatológico, detecção de RLEP, e sequenciamento do genoma completo do M. leprae. Foram clinicamente diagnosticados 351 casos, divididos nos grupos com manifestação clínica clássica e não clássica, e casos assintomáticos e 482 contatos saudáveis. A análise comparativa dos resultados demonstrou que a detecção molecular de RLEP em lóbulo auricular apresentou maior sensibilidade e especificidade e concordância com o diagnóstico clínico (72,5, 70,4 e Kappa= 0,42 respectivamente), seguida da detecção em biópsia de pele (sensibilidade= 65,8%), sorologia Anti-PGL-I com 61,2% (52,2 de especificidade), baciloscopia (41,7%) e histopatologia (25,0%). Na associação do RLEP com a sorologia, houve o aumento da correlação com a clínica (Kappa= 0,55). Na avaliação do perfil de cepas circulantes, o perfil mais frequente foi o perfil 4N (52/66- 78,8%), seguido do subtipo 4P (4/66- 6,1%), 3I (9/66- 13,6%), e 1D (1/66- 1,5%). Na análise das regiões de droga-resistência, obtivemos 3/101 (3%) de mutação conferindo droga-resistência a dapsona, gene folP1. 1/40 (2,5%) conferindo resistência às quinolonas, em gyrB. A cepa resistente em gyrB, apresentava também mutação em folP1, e nos genes fadD9, ribD, pks4 e nth, considerada hipermutante. Nossos achados direcionam o exame de detecção molecular de RLEP por qPCR associado à sorologia Anti-PGL-I como boas ferramentas para diagnóstico laboratorial da hanseníase, e que as cepas do tipo 4, originárias da África, são o tipo mais frequentes na Amazônia e que existem cepas circulantes com resistência às medicações do esquema de poliquimioterapia atual e às drogas alternativas.
Abstract: Leprosy is a chronic disease, disabling and difficult to diagnose in all its clinical manifestations. The aims of this study were to identify the laboratory marker that presents greater sensitivity and specificity for diagnosis, to genetically understand the strains of M. leprae circulating in the Pará State and to evaluate the region drug resistance reality. A multidisciplinary team evaluated 833 individuals using different strategies at URE Dr. Marcello Candia, and in 14 municipalities in Pará. All individuals were clinically evaluated, and biological samples were collected for comparative analysis of the results of slit skin smear microscopy, molecular detection of the bacillus by qPCR RLEP in ear lobes, IgM Anti-PGL-I antibodies titration, and histopathological lesion skin biopsy, lesion qPCR RLEP, and M. leprae whole genome sequence. 351 cases were clinically diagnosed, divided into groups: individuals with classic and non-classic clinical manifestations, asymptomatic cases and 482 healthy contacts. The comparative analysis of the results demonstrated that ear lobe RLEP detection presented greater sensitivity, specificity and agreement with the clinical diagnosis (72.5, 70.4 and Kappa = 0.42 respectively), followed by skin biopsy (sensitivity= 65.8%), Anti-PGL-I serology with 61.2% (52.2 specificity), slit smears skin (41.7%) and histopathology (25.0%). The RLEP association to serology, showed an increased in laboratorial correlation with the clinic diagnosis (Kappa= 0.55). The circulant streains evaluation, we detected that the most frequent profile was profile 4N (52/66- 78.8%), followed by 4P subtype (4/66- 6.1%), 3I (9/66 -13, 6%), and 1D (1/66- 1.5%). In the drug resistance analysis, we obtained 3/101 (3%) mutation in folP1 gene, conferring dapsone resistance. 1/40 (2.5%) gyrB mutations, conferring quinolones resistance. The gyrB resistant strain also had mutation in folP1, and in the fadD9, ribD, pks4 and nth genes, considered a hypermutant strain. Our findings showed that qPCR RLEP molecular test associated with Anti-PGL-I serology were a good tool for leprosy laboratorial diagnosis, and that type 4 strains, originating in Africa, are the most frequent type in the Amazon. And we find drug-resistant strains, and a hypermuted strain circling in the region. The strains were resistant to the current polychemotherapy regimen and the alternative drug regimen.
Palavras-chave: Hanseníase
Mycobacterium leprae
Técnicas de genotipagem
Técnicas de procedimentos diagnósticos
Resitência microbiana a medicamentos
Área de Concentração: BIOLOGIA CELULAR
Linha de Pesquisa: PATOLOGIA DE CÉLULAS E MOLÉCULAS
CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MORFOLOGIA::CITOLOGIA E BIOLOGIA CELULAR
País: Brasil
Instituição: Universidade Federal do Pará
Sigla da Instituição: UFPA
Instituto: Instituto de Ciências Biológicas
Programa: Programa de Pós-Graduação em Neurociências e Biologia Celular
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil
Fonte URI: Disponível na internet via correio eletrônico: biblicb.420@gmail.com
Aparece nas coleções:Teses em Neurociências e Biologia Celular (Doutorado) - PPGNBC/ICB

Arquivos associados a este item:
Arquivo Descrição TamanhoFormato 
Tese_PapelBiologiaMolecular.pdf3,15 MBAdobe PDFVisualizar/Abrir


Este item está licenciado sob uma Licença Creative Commons Creative Commons