Dissertações em Neurociências e Biologia Celular (Mestrado) - PPGNBC/ICB

URI Permanente para esta coleçãohttps://repositorio.ufpa.br/handle/2011/2375

O Mestrado Acadêmico pertence ao Programa de Pós-Graduação em Neurociências e Biologia Celular (PPGNBC) do Instituto de Ciências Biológicas (ICB) da Universidade Federal do Pará (UFPA).

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Acesso aberto (Open Access)
Análise da proteção de citocinas após exposição celular in vitro com os antígenos ML2478 e ML0840 do Mycobacterium leprae
(Universidade Federal do Pará, 2019-09) MESSIAS, Ana Caroline Cunha; SALGADO, Claudio Guedes; http://lattes.cnpq.br/2310734509396125; http://orcid.org/0000-0003-3961-7764
O diagnóstico de casos de hanseníase oligossintomáticos pode possibilitar a realização de intervenções antes do aparecimento de incapacidades físicas. No entanto, devido o diagnóstico ainda ser essencialmente clínico e a evolução lenta da patologia, há dificuldade no reconhecimento desses casos, pois as lesões são discretas e com sutis alterações de sensibilidade. Na maioria das vezes os pacientes são diagnosticados quando já apresentam características clínicas evidentes e/ou também incapacidades físicas. Assim se faz necessário o desenvolvimento de ferramentas laboratoriais que auxiliem no diagnóstico precoce da doença. O ensaio de imunidade celular Whole Blood Assay (WBA) é uma técnica de baixo custo e de fácil execução que proporciona condições para a triagem de antígenos, sendo favorecido em áreas onde a hanseníase é endêmica, podendo facilitar a incorporação de um teste em locais com menor acesso aos laboratórios sofisticados. O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta imune celular após exposição in vitro de sangue periférico aos antígenos ML2478 e ML0840 do Mycobacterium leprae. Foram selecionados 87 indivíduos para a quantificação das citocinas Interferon-γ (IFN-γ), Interleucina (IL)-10, IL-17 e Fator de Transformação de Crescimento-β1 após exposição com os antígenos de interesse, específicos do M. leprae, pelo WBA durante 24 horas. No total foram avaliados 47 casos de hanseníase distribuídos em: 6 tuberculoide e 14 dimorfo-tuberculoide (DT), 13 dirmorfo-Virchowiano, 6 Virchowiano; e 8 escolares (ESC) diagnosticados com hanseníase durante estratégia de busca ativa do grupo (casos oligossintomáticos nas formas clínicas: 1 primariamente neural, 1 indeterminada, 6 DT). Os demais 47 indivíduos correspondem a 20 contatos, 13 ESC sadios e a 7 indivíduos com outras doenças dermatológicas. A análise das citocinas sugere que o balanço entre IFN-γ e IL-10 pode indicar indivíduos que estão progredindo ao polo Th2 e que IL-17 e TGF-β1 podem ser utilizadas para acompanhar indivíduos que apresentem resposta semelhante aos casos de hanseníase. A produção das citocinas IFN-γ, IL-10, IL-17 e TGF-β1 pelo estímulo com as proteínas ML2478 e ML0840 não diferiu entre os escolares casos e escolares sadios. E a citocina IL-17 demonstrou produção superior nos casos atendidos na URE em relação aos escolares caso e aos indivíduos dos grupos controles.
Acesso aberto (Open Access)
Ativação do receptor canabinóide tipo 1 (CB1r) previne o estresse oxidativo cerebral e inibe o comportamento tipo agressivo em Danio rerio (Zebrafish)
(Universidade Federal do Pará, 2022-08-17) PINHEIRO, Emerson Feio; SILVA, Anderson Manoel Herculano Oliveira da; http://lattes.cnpq.br/8407177208423247
A agressão é um conjunto de ações complexas que envolvem diversos fatores de natureza genética, neurofisiológica, hormonal e comportamental. Além disso, o estado redox cerebral também pode influenciar o comportamento agressivo em diferentes espécies. Assim, moduladores desse processo podem influenciar na expressão de episódios agressivos, dentre eles está o Sistema Endocanabinóide que atua como importante neuromodulador do SNC, além de promover um efeito antioxidante em diferentes condições. No entanto, sua participação na modulação de comportamentos agressivos precisa de maior compreensão. Nesse contexto, este estudo avaliou o papel do receptor canabinóide tipo 1 (CB1r) no estado redox cerebral e no comportamento agressivo em Danio rerio (zebrafish). Para isso, 68 animais foram subdivididos em grupos: (a) Controle (n=26), (b) ACEA (n=30) e (c) AM-251 (n=12), todos tratados com as drogas de interesse: (a) Veículo (NaCl 0,9%); (b) agonista ACEA 1 mg/kg; (c) antagonista o AM-251 1 mg/kg. Os animais foram isolados aos pares, sem contato físico por 24 horas, seguido de pré-tratamento e após 30 minutos de farmacocinética as interações sociais foram filmadas por 30 minutos, os indivíduos foram identificados como Dominantes ou Subordinados e os cérebros foram coletados para avaliação do estado redox cerebral desses indivíduos. Nossos resultados demonstraram, pela primeira vez, que a ativação do CB1r pelo agonista ACEA modula o comportamento do tipoagressivo e por consequente interferiu parcialmente no estabelecimento da hierarquia social em zebrafish, através de uma mecanismo redox-independente. Sugerimos, assim, que o tratamento agudo com alvo ao CB1r é uma ferramenta neurofarmacológica útil para elucidar o papel do SEC na interação social e no comportamento agressivo, permitindo translacionar com inúmeras patologias que tenham a agressividade como desordem comportamental.
Acesso aberto (Open Access)
Avaliação da seletividade olfatória causada pela infecção por SARS-COV-2
(Universidade Federal do Pará, 2022-09-16) ALMEIDA, José Ramon Gama; BASTOS, Gilmara de Nazareth Tavares; http://lattes.cnpq.br/2487879058181806; ÁVILA, Paulo Eduardo Santos; http://lattes.cnpq.br/4673218055614655
Introdução: A perda súbita do olfato é um dos sintomas mais prevalentes da COVID-19. O olfato vai desde detectar odores de alerta no ambiente até construir nossas experiências mais prazerosas. Esse sentido estimula uma complexa rede neural, incluindo o lobo temporal, a amígdala, a ínsula e grande parte do lobo límbico: a perda do olfato não deve ser considerada apenas um sintoma sensorial, mas também uma síndrome psicossensorial. Objetivos: Este estudo teve como objetivo avaliar a seletividade olfativa e a sensação trigeminal em alterações olfativas relatadas por pacientes diagnosticados com COVID-19. Métodos: Estudo de casocontrole randomizado envolvendo 88 indivíduos: COVID-19 sem disfunção olfativa previamente diagnosticada antes do período de pandemia; com COVID-19 com disfunção olfativa diagnosticada antes do período de pandemia; e sem COVID-19 e perda de sensibilidade olfativa durante o período de pandemia, com anosmia ou hiposmia persistente após infecção por SARS-CoV-2. Todos os indivíduos participantes do estudo (grupos controle/intervenção) diagnosticados com ou sem COVID-19 foram submetidos a ficha de coleta de dados de avaliação e teste sensorial psicofísico que incluiu teste olfativo, teste de memória olfativa, teste de limiar olfativo e teste de sensação trigeminal (CEP-UFPA: 40962420.2 .0000.0018). ANOVA segue o teste de Tukey. Resultados: Os resultados demonstraram que todos os pacientes com ou sem diagnóstico de COVID-19, perdem a capacidade de não identificar o odorante da essência de banana quando comparados ao grupo saudável sendo controle significativo vs. COVID-19 sem p<0,0002 e controle significativo vs. COVID-19 com p<0,0010 e não significativo COVID-19 sem vs. COVID-19 com p>0,05. Para o teste de memória olfativa de curto prazo que todos os pacientes com ou sem diagnóstico de COVID-19, demonstraram um aumento na identificação errônea de odorantes apresentados quando comparados a controles saudáveis, assim como no limiar olfativo foram observadas diferenças na percepção entre os grupos. analisado. A ausência de pelo menos uma função quimiossensorial (sensação de resfriamento) do trigêmeo durante o período de teste foi relatada pela qual todos os pacientes com ou sem diagnóstico de COVID-19, quando comparados ao grupo controle saudável. Conclusão: Desta forma, a infecção por SARS-CoV-2 pode estar promovendo uma disfunção olfativa que afeta a percepção do odor de banana, bem como as características de longo prazo afetadas como memória olfativa, limiar olfativo e sensação trigeminal de perda olfativa que o COVID -19. 19 gera em pacientes pode fornecer pistas para intervenções terapêuticas destinadas a prevenir, aliviar ou curar a disfunção olfativa de longo prazo no COVID-19.
Acesso aberto (Open Access)
Avaliação do potencial neuroprotetor do beta-cariofileno em modelo murino de Doença de Parkinson induzido por 6-Hidroxidopamina
(Universidade Federal do Pará, 2019-06) AMARAL, Anderson Valente; YAMADA, Elizabeth Sumi; http://lattes.cnpq.br/7240314827308306
A doença de Parkinson (DP) é tradicionalmente classificada como uma desordem motora caracterizada por tremor em repouso, rigidez muscular, instabilidade postural e bradicinesia. Tais sintomas ocorrem e função da perda progressiva de neurônios dopaminérgicos presentes na substância negra pars compacta (SNpc) e consequente diminuição de dopamina no estriado (STR). A busca por alternativas terapêuticas que possam interromper ou retardar o curso temporal de neurodegeneração na DP é essencial para promover uma melhor qualidade de vida aos pacientes. Assim, investigamos se o beta-cariofileno (BCP) possui efeitos neuroprotetores em modelo murino de DP induzido por 6-hidroxidopamina (6-OHDA). Para tal, realizamos testes comportamentais como teste de rotações induzidas por apomorfina e teste de exploração em campo aberto, mensuramos a densidade óptica de fibras estriatais, quantificamos neurônios e micróglias na SNpc por estereologia e avaliamos a capacidade antioxidante total do STR e mesencéfalo. Nossas evidências demonstram que o BCP: reduziu o grau de neurodegeneração induzido por 6-OHDA, melhorou o desempenho motor, protegeu fibras estriatais e neurônios dopaminérgicos, além de diminuir a ativação microglial na SNpc. Entretanto, não alterou a capacidade antioxidante total no STR e mesencéfalo. Dessa forma, o BCP demonstrou um potencial efeito neuroprotetor no modelo de DP induzido por 6-OHDA, que merece ser melhor caracterizado para futuras aplicações translacionais.
Acesso aberto (Open Access)
Caracterização química, avaliação da toxicidade oral aguda e da atividade antinociceptiva do extrato metanólico das folhas de Montrichardia linifera (Arruda) Schott
(Universidade Federal do Pará, 2024-08) COSTA, Wellington Junior Taisho Nagahama; AMARANTE, Cristine Bastos do; http://lattes.cnpq.br/4101983776191966; https://orcid.org/0000-0002-8602-8180; BASTOS, Gilmara de Nazareth Tavares; http://lattes.cnpq.br/2487879058181806
Introdução: Montrichardia linifera (Arruda) Schott é popularmente conhecida como “aninga”, “aningaçu”, “aningaíba” e “aninga-do-igapó”. As compressas e emplastros das folhas são da planta medicinal utilizados para tratar abscessos, tumores e dores causadas por ferroada de arraias. Objetivo: O estudo teve como objetivo investigar o potencial antinociceptivo do extrato metanólico das folhas de Montrichardia linifera (EMFML), bem como realizar a caracterização química e toxicidade oral aguda. Material e métodos: As folhas foram coletadas durante a estação chuvosa e o extrato metanólico foi obtido após extração em gradiente em diferentes solventes. O EMFML foi analisado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e ressonância magnética nuclear (RMN). A avaliação do teste de toxicidade oral aguda foi utilizada para observar a presença de substâncias tóxicas. Posteriormente, foram utilizados os testes de ácido acético, placa quente e formalina para avaliar os efeitos analgésicos. Resultados: A análise do CLAE fingerprint permitiu a identificação de rutina, quercetina e epicatequina. A análise dos espectros de RMN identificou rutina e quercetina, bem como os flavonoides luteolina e crisoeriol. O EMFML não demonstrou efeitos considerados tóxicos. No teste do ácido acético, o EMFML inibiu a dor periférica em 51,46% (p < 0,05) na dose de 50 mg/kg e 75,08% (p < 0,001) na dose de 100 mg/kg. O teste da placa quente avaliou o tempo de latência dos animais, demonstrando atividade central em 30 e 60 min aumentando em 164,43% (p < 0,01) e 122,95% (p < 0,05) na dose de 50 mg/kg, e 162,62% (p < 0,01) e 136,68% (p < 0,05) na dose de 100 mg/kg. O teste da formalina avaliou o efeito antinociceptivo central e periférico do EMFML. Na fase neurogênica, redução de 35,25% (p < 0,05) na dose de 50 mg/kg e 52,30% (p < 0,01) na dose de 100 mg/kg. Na dor inflamatória, foi observada uma redução de 66,39% (p < 0,0001) e 72,15% (p < 0,0001). Conclusão: A atividade antinociceptiva corrobora com o seu uso etnofarmacológico. Este efeito analgésico está provavelmente associado aos flavonoides identificados, todos possuem propriedades antioxidantes, anti-inflamatórias e antinociceptivas. Além disso, o EMFML não apresentou toxicidade.
Acesso aberto (Open Access)
Efeitos do tratamento agudo sistêmico de beta-cariofileno em camundongos fêmea saudáveis e em modelo de inflamação sistêmica
(Universidade Federal do Pará, 2021-07) MONTEIRO, Rayan Fidel Martins; BASTOS, Gilmara de Nazareth Tavares; http://lattes.cnpq.br/2487879058181806
Todas as funções do sistema endocanabinoide (SEC) ainda não são completamente lucidadas, entretanto esse sistema é conhecido por apresentar um efeito neuromodulador, atribuído essencialmente aos receptores canabinóide do tipo I (CB1R), dos quais a ativação sistêmica induz efeitos psicoativos. Diferentemente, o efeito imunomodulador do SEC, atribuído essencialmente sobre os receptores canabinóide do tipo II (CB2R), tem sido demonstrado como alternativa de tratamento de diversas doenças inflamatórias agudas ou crônicas, incluindo doenças neurodegenerativas em modelos animais via ativação crônica de CB2R. Entretanto, ainda não está claro os efeitos desse tratamento logo após sua administração. Neste sentido, procuramos investigar os efeitos do tratamento agudo-sistêmico do β-cariofileno (BCP), um fito-canabinóide agonista de CB2R em modelo murino de neuroinflamação induzidos por LPS. Realizamos o teste de Campo aberto (CA) 2 e 4 h após a indução de sickness behavior por Lipopolissacarídeo (LPS) e demonstramos que nos animais pré-tratados com BCP, na janela de 2 h, houve manutenção na qualidade de movimento nos animais que receberam LPS sem alteração na indução de sickness behavior, e aumento da atividade na região aversiva do aparato nos animais que não receberam LPS. Indicando efeito imuno e neuromodulador do BCP. Realizamos também o teste do Labirinto aquático de Morris (LAM) 24 h após a inoculação de LPS, entretanto não foi possível discriminar alterações no aprendizado, porém os animais inoculados e não tratados demonstraram ser mais propensos a formar memória espacial. Por fim, observamos que o pré-tratamento com BCP aumenta a peroxidação lipídica e concentração de nitrito no encéfalo 2 h após a inoculação de LPS, sugerindo assim, aumento imediato do estresse oxidativo pelo tratamento agudo com BCP em modelos de neuroinflamação. Portanto, é de fundamental importância a continuidade da pesquisa dos efeitos neurológicos e imunológicos imediatos ao tratamento com BCP em modelos de animais saudáveis e em modelos neuroinflamatórios para melhor determinação dos riscos atribuídos a esse tratamento, bem como, a adição do tratamento agudo em detrimento do crônico em diferentes patologias neurológicas.
Acesso aberto (Open Access)
Glutationa modula a liberação de adenosina em cultura primária de astrócitos corticais de camundongo
(Universidade Federal do Pará, 2022-09-06) SILVA, Mateus dos Santos; OLIVEIRA, Karen Renata Herculano Matos; http://lattes.cnpq.br/3032008039259369; SILVA, Anderson Manoel Herculano Oliveira da; http://lattes.cnpq.br/8407177208423247
A glutationa (GSH) é um dos principais antioxidantes no Sistema Nervoso Central (SNC) e um potencial gliotransmissor, induzindo ondas de cálcio no citosol de células gliais. A adenosina (Adn) é um neuromodulador amplamente expresso no SNC e os seus níveis extracelulares são um fator crítico para determinar o seu efeito no tecido nervoso. Sabe-se que vias dependentes de Ca2+ regulam a liberação de Adn. Uma vez que a GSH tem a capacidade de induzir ondas de Ca2+ no citosol de células gliais, o presente trabalho se propõe a investigar se essa molécula pode regular os níveis extracelulares de Adn. Para avaliar isso, foram utilizadas culturas primárias de astrócitos corticais mantidas em DMEM+10% SBF em estufa de CO2 (37oC, 95% O2/5% CO2) por 12-15 dias, quando atingiram a confluência. As células foram incubadas com tampão Hank por diferentes intervalos de tempo, após o qual foi realizada a coleta dessa solução e os neurotransmissores ali presentes foram quantificados por Cromatografia Líquida de Alta Eficácia. Nossos dados mostram que a GSH induz um aumento de 80% nos níveis extracelulares de Adn em dois tempos analisados: 5 e 20 minutos. A remoção da GSH do meio de incubação faz a concentração de Adn retornar aos níveis basais. A remoção de Na+ ou Ca2+ do meio não interferiu no efeito da GSH. O bloqueio dos transportadores equilibrativos de nucleosídeos por dipiridamole (10 µM) diminuiu significativamente os níveis de Adn no meio, mas não interferiu na ação da GSH. A fim de avaliar se o efeito da GSH deriva de uma modulação indireta sobre a liberação de glutamato ou GABA (Dois agentes descritos como reguladores da liberação de Adn), foi realizada a quantificação desses transmissores. Ambos foram significativamente aumentados na presença da GSH. No entanto, diferente do que foi observado com a Adn, a remoção de Na+ do meio de incubação mitigou o efeito da GSH sobre a liberação de glutamato. A incubação dos astrócitos com GABA (50 e 100 µM) não influenciou na concentração extracelular de Adn em nosso modelo experimental, descartando uma modulação GABAérgica por trás do efeito da GSH. A avaliação de agentes redox demonstrou que compostos tiol reproduzem o efeito da GSH, enquanto o antioxidante não-tiol alfa tocoferol não regulou os níveis extracelulares de Adn. Desse modo, o presente trabalho conclui que os astrócitos expressam um componente sensível à GSH que pode ser modulado pelo seu grupamento sulfidrila.
Acesso aberto (Open Access)
Inibição de ciclooxigenase-2 (COX-2) em camundongos infantis saudáveis: consequências sobre o comportamento e o perfil oxidativo
(Universidade Federal do Pará, 2022-08-26) LIMA, Klinsmann Thiago; BASTOS, Gilmara de Nazareth Tavares; http://lattes.cnpq.br/2487879058181806
No sistema nervoso central a ciclooxigenase 2 (COX-2) é uma enzima constitutiva, expressa por neurônios de diferentes regiões cerebrais, que atua na manutenção da homeostase neural, modulando a plasticidade sináptica e a geração de novos neurônios. Os Antiinflamatorios não esteroidais (AINEs) são fármacos de escolha que atuam na inibição das enzimas COXs, sendo a nimesulida (NMS) um fármaco desta classe. Diversos estudos vêm demonstrando o papel dessas enzimas em distúrbios neurológicos e neuropsiquiátricos como a Doença de Parkinson, Doença de Alzheimer, epilepsia, depressão e esquizofrenia. Desse modo, o objetivo do presente trabalho foi investigar os efeitos da inibição de COX-2 em camundongos infantis saudáveis sobre os critérios comportamentais e bioquímicos, utilizando a NMS como ferramenta de bloqueio farmacológico. Para isso, foram utilizados camundongos infantis Swiss, machos, com idades entre 21 e 34 dias. Os animais foram divididos aleatoriamente em quatro grupos: (1) Veículo, (2) NMS 2,5mg/kg, (3) NMS 5mg/kg e (4) NMS 10mg/kg. Duas injeções de NMS/Veículo foram administradas ao dia por via intraperitoneal. Ao longo do experimento, diariamente, foi registrada a massa corporal dos animais e eles foram submetidos aos testes comportamentais: Teste de campo aberto (TCA), labirinto em cruz elevado (LCE), teste da caixa claro/escuro (TCE) e reconhecimento de novo objeto (RNO). Além disso, as amostras dos encéfalos foram coletadas para as análises bioquímicas. Os resultados demonstraram a indução de estresse oxidativo com níveis aumentados de peroxidação lipídica no córtex e hipocampo, bem como a expressão de um comportamento ansiogênico, observado no LCE, possivelmente potencializado pelo medo. No RNO, os animais do grupo NMS 5mg/kg apresentaram um déficit na memória de reconhecimento de novos objetos, e consequentemente, na memória de curta duração. Dessa forma, nossos resultados demonstraram que a inibição in vivo de COX-2 em animais infantis induz um comportamento tipo-ansioso possivelmente potencializado pelo medo, porém não afeta a exploração e a locomoção desses animais. Ainda, a inibição de COX-2 induziu estresse oxidativo cortical e hipocampal. Portanto, a inibição de COX- 2 em animais infantis e não inflamados pode comprometer funções cognitivas como memória e aprendizado, bem como alterar o perfil oxidativo cerebral.
Acesso aberto (Open Access)
O transportador XCG- medeia a captação de glutamato independente de sódio em cultura primária de células gliais da cóclea de camundongos neonatos
(Universidade Federal do Pará, 2022-10-20) MARTINS, Luana Carvalho; OLIVEIRA, Karen Renata Herculano Matos; http://lattes.cnpq.br/3032008039259369
A cóclea é um órgão sensorial do sistema auditivo cujas sinapses excitatórias são mediadas por L-Glutamato. Uma vez que o glutamato possui repercussões fisiológicas e patológicas na cóclea, ressalta-se o papel crucial de mecanismos de transporte de glutamato capazes de regular a concentração extracelular desse neurotransmissor a fim de manter a função auditiva. Dentro desse contexto, neste estudo buscamos investigar a atividade e expressão de sistemas de transporte de glutamato em modelo in vitro de culturas primárias de células gliais cocleares obtidas de camundongos neonatos da linhagem Balb/C. Para isso, determinamos o transporte de glutamato dependente e independente de sódio por meio de ensaios de captação e liberação de glutamato cujas concentrações extracelulares foram quantificadas por meio de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada a um detector de fluorescência. Por fim, as células foram submetidas ao ensaio de imunofluorescência para marcação do transportador de glutamato independente de sódio XCG- . Em nossos resultados, demonstramos que as células gliais cocleares apresentam um sistema de transporte de glutamato mediado pelo transportador XCG- . Tais dados sugerem um possível papel deste transportador no controle das concentrações extracelulares de glutamato e regulação do estado redox, que podem auxiliar na preservação da função auditiva.

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