Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal - PPGCAN/Castanhal

URI Permanente desta comunidadehttps://repositorio.ufpa.br/handle/2011/2335

O Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal (PPGCAN) é um programa do Campus Universitário de Castanhal (CCAST) da Universidade Federal do Pará (UFPA), Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA) e Universidade Federal Rural da Amazônia (UFRA). O Programa iniciou o nível de Mestrado em 1999 junto à CAPES/MEC, tendo aprovação de sua proposta de Doutorado junto à agência em 2008, com início da primeira turma em 2009, o que certamente contribuirá à formação de massa crítica regional.Se caracteriza por apresentar um conjunto de disciplinas que repassam aos alunos um embasamento teórico e prático, capacitando os mesmos a aplicarem os conhecimentos adquiridos no avanço regional da produção animal. Direcionando as linhas de pesquisa do curso à nutrição, biotecnologia, pastagens, conservação de recursos genéticos, reprodução, sanidade animal, bovinocultura, bubalinocultura, animais silvestres, ecologia aquática e aquicultura.

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Avaliação da dinâmica folicular, atividade ovariana e involução uterina durante o pós-parto de búfalas (Bubalus bubalis) criadas em condições tropicais
(Universidade Federal do Pará, 2015-08-11) SILVA, Aluizio Otavio Almeida da; RIBEIRO, Haroldo Francisco Lobato; http://lattes.cnpq.br/1614582293203770
Neste experimento objetivou-se monitorar a dinâmica folicular e atividade ovariana de fêmeas bubalinas no puerpério através de exames ultrassonograficos, investigando-se alguns eventos relacionados a atividades ovariana no Período Pós-Parto (PPP), e a involução uterina, desde o 7º dia de paridas, até o segundo cio pós-parto. Foram utilizadas dez (10) fêmeas mestiças entre as raças Murrah e Mediterrânea com parições eutócicas e sem histórico de problemas reprodutivos, manejados em regime semi extensivo, com disponibilidade de água e suplementação mineral ad libitum. Constatou-se a presença de padrões de crescimento folicular de duas ondas (2OCF) e de três ondas (3OCF), na proporção de 40% e 60%, respectivamente. O 1º e 2º cios pós parto se manifestaram aos 37,00+13,12 e 58,83+14,56 dias pós parto para os animais de 2OCF e aos 45,00+15,19 e 66,00+23,02 dias pós parto para os animais de 3OCF. Os intervalos estrais foram de 21,00+2,44 e 21.83+2,56 dias para os animais de 2OCF e 3OCF, respectivamente. A emergência folicular, ocorreu em média aos 1,02+0,34 e 7,25+0,50 dias do ciclo para a primeira e segunda onda, respectivamente, dos animais do 2OCF e aos 0,93+0,35; 6,6+1,36 e 10,83+1,94 dias do ciclo para a primeira, segunda e terceira onda, respectivamente, para os animais de 3OCF. O diâmetro folicular pré ovulatório foi de 13,08+2,6 e 11,45+0,35 mm para o 1º e 2º cios pós parto dos animais de 2OCF e 13,24+2,41 e 12,74+1,10 mm para o 1º e 2º cios pós parto dos animais de 3OCF. A involução uterina ocorreu em média aos 29,00+1,48 dias, P<0,05, com diâmetro do corno uterino pós gravídico (CUPG) em torno de 18,84+0,33 mm. A taxa da involução uterina foi de 0,97+0,21, (P<0,05). Observou-se alta correlação entre o PPP e CUPG, representada por r=-0,8179 (P<0,0001), sendo possível estabelecer uma regressão linear entre os dois parâmetros, representada pela equação Y=40,8809 + (-0,8214.X) (P<0,0001).
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Avaliação da técnica de aspiração ovocitária transvaginal (Ovum Pick Up) e produção in vitro de embriões da raça nelore (Bos taurus indicus) oriundos de doadoras com alterações da fertilidade
(Universidade Federal do Pará, 2003-09-11) SOUSA, Alysson Jorge de Oliveira; OHASHI, Otávio Mitio; http://lattes.cnpq.br/5547874183666459
Este experimento teve como objetivo avaliar a possibilidade da utilização de fêmeas zebuínas de elevada qualidade genética, com problemas de fertilidade, adquiridos após um programa de transferência convencional de embriões, como doadoras de ovócitos em um programa de Ovum Pick Up e Produção In Vitro de embriões. Fêmeas da raça Nelore (n=16) (Bos taurus indicus), com idade média de 11 anos e 7 meses, foram submetidas às mesmas condições de ambiente, alimentação e manejo. Estes animais foram retirados do programa de T.E. por apresentarem problemas de fertilidade (cistos ovarianos, infecções genitais, mucometra e alguns casos de repetições de cio sem causa aparente). Os animais foram divididos em dois grupos conforme o tipo de patologia: GRUPO I (n=08) composto por animais que apresentaram patologias ovarianas (cistos) e GRUPO II (n=08) formado por animais com patologias extra ovarianas, ambos os grupos foram submetidos à aspiração folicular (OPU) utilizando dois tipos de agulhas (21G ; 19G ) e pressões (55 e 70mmHg) divididos em quatro tratamentos (T1 = 55/21G; T2 = 55/19G; T3 = 70/21G e T4 = 70/19G), posteriormente os ovócitos submeteramse a PIV. Foram realizadas 149 aspirações e colhidos 879 ovócitos (5,9 4,88) onde GRAU I = 16%; GRAU II = 43%; GRAU III = 21% e GRAU IV = 20%. As médias de ovócitos colhidos no GRUPO I foram (T1 = 7,06 5,10; T2= 7,00 3,64; T3 = 10,60 6,51 e T4 = 2,78 2,59) para os animais pertencentes ao GRUPO II obteve-se (T1= 4,90 4,47; T2= 2,93 3,05; T3 = 6,11 4,11 e T4 = 2,70 2,00). Para as médiasde ovócitos viáveis os resultados foram os seguintes: (T1 = 4,35 3,01; T2 = 4,88 2,96; T3 = 6,87 3,91 e T4 = 1,89 1,90) para o GRUPO I e (T1 = 2,70 2,22; T2 =1,92 1,98; T3 = 3,47 2,27 e T4 = 2,00 1,05) para o GRUPO II. Neste experimento foram levados à PIV 538 ovócitos dos quais 161 (32,85%) clivaram e 65 (13,26%) resultaram em Mórula ou Blastocistos. A análise estatística dos resultados não demonstrou diferença significativa entre os grupos quanto a colheita ovocitária. Quando analisada somente a pressão de sucção, foi observado que o tipo de agulha está diretamente relacionado a pressão da bomba de vácuo. Os melhores resultados foram obtidos com o tratamento T3 = 70/21G, além disso pode-se observar que as melhores médias de ovócitos colhidos foram as obtidas no grupo de animais que apresentaram cistos ovarianos (GRUPO I). Desta forma, concluímos neste experimento que a utilização da técnica de OPU/PIV é uma alternativa de grande utilidade no prolongamento da vida reprodutiva de animais zebuínos com alterações na fertilidade.
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Avaliação de diferentes diluentes na criopreservação de sêmen ovino (Ovis aries)
(Universidade Federal do Pará, 2010-08-31) GUIMARÃES, Adrianne Araújo; VALE, William Gomes; http://lattes.cnpq.br/7486151987920142
Durante a criopreservação são inúmeras as alterações sofridas pelas células espermáticas, o que conduz à queda na motilidade e perda da sua viabilidade pós-descongelação. Por este motivo, surge a necessidade de aperfeiçoar os processos de tecnologia do sêmen, principalmente quanto ao uso de diluentes. O objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade de espermatozóides ovinos, submetidos ao processo de diluição e criopreservação, utilizando-se 3 diluentes (TES, TRIS e PBS) e 3 tempos de equilíbrio (4h, 8h e 12h), sendo o estudo dividido em 9 grupos: TES-4h, TES-8h, TES-12h, TRIS-4h, TRIS-8h, TRIS-12h, PBS-4h, PBS-8h e PBS-12h. Após a colheita, o sêmen foi avaliado macro e microscopicamente, e prédiluído nas soluções TES, TRIS e PBS, no entanto sem a adição dos crioprotetores (Solução A), onde permaneceram por 1h. Posteriormente, o sêmen foi diluído com as soluções TES, TRIS e PBS, já contendo os crioprotetores, novamente avaliado, para então ser envasado, sendo submetido aos diferentes tempos de equilíbrio, e em seguida, congelado. Após a descongelação, foi avaliado a motilidade e o vigor, e após o TTR, a motilidade, o vigor e o desprendimento do acrossoma. Na criopreservação com TRIS, a motilidade e o vigor foram estatisticamente similares (p>0,05) no sêmen congelado com equilíbrio de 4h (17,2% e 1,6), 8h (22,4% e 2,1) e 12h (14,8% e 1,6) (p>0,05). Após o TTR não foi observado diferença estatística (p>0,05) para a motilidade e o vigor em 4h (10,4% e 1,1) e em 12h (10,0% e 1,2) de equilíbrio, porém houve um aumento em 8h (15,6% e 1,6) (p<0,05). Não houve diferença estatística (p>0,05) no índice de desprendimento do acrossoma entre 4h (35,1) e 12h (37,6) de equilíbrio, havendo uma redução nestes índices em 8h (30,4) (p<0,05). Na criopreservação com TES, a motilidade do sêmen congelado com equilíbrio de 4h (24,8%) e 12h (27,6%) foram estatisticamente similares (p>0,05), sendo que o tempo de 8h (40,4%) diferiu estatisticamente dos demais. O vigor foi estatisticamente similar (p>0,05) para o sêmen descongelado com equilíbrio de 4h (2,0), 8h (2,6) e 12h (2,3), não diferindo estatisticamente (p>0,05). Após o TTR não foi observado diferença estatística (p>0,05) para a motilidade em 4h (18,8%) e em 12h (17,4%) de equilíbrio, porém houve um aumento em 8h (29,6%) (p<0,05). Em relação ao vigor e ao desprendimento do acrossoma não houve diferença estatística (p>0,05) em 4h (2,0 e 35,8), 8h (2,1 e 33,4) e 12h (1,8 e 42,2) de equilíbrio. Na criopreservação com o PBS, não foram observados motilidade e vigor após a descongelação. Esses resultados indicam que o diluente à base de TES e o tempo de equilíbrio de 8h mostraram-se mais adequados para a diluição e congelação de sêmen ovino.
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Biometria testicular, caracterização e congelamento de sêmen de macacos-de-cheiro de vida livre (Saimiri vanzolinii, S. cassiquiarensis e S. macrodon) e cativeiro (S. Collinsi) em água de coco em pó (ACP-118®)
(Universidade Federal do Pará, 2014-06-24) OLIVEIRA, Karol Guimarães; DOMINGUES, Sheyla Farhayldes Souza; http://lattes.cnpq.br/2794753357251149
Recentemente, o táxon Saimiri sciureus (macaco-de-cheiro) foi revisado e algumas subespécies são agora classificadas, por alguns autores, como espécies, por exemplo: o Saimiri collinsi, o S. cassiquiarensis e o S. macrodon. Características fenotípicas nestas espécies são bem determinadas. No entanto, informações sobre aspectos reprodutivos são ainda bastante escassas. O objetivo da primeira fase deste trabalho foi descrever e correlacionar a biometria testicular com a qualidade do sêmen de macacos-de-cheiro de cativeiro (S. collinsi) e de vida-livre (S. vanzolinii, S. cassiquiarensis e S. macrodon). Foram mensurados comprimento, largura, altura, circunferência e volume testiculares, bem como motilidade, vigor, integridade de membrana plasmática e morfologia espermática para a correlação de dados. Não foi observada diferença entre os testículos direito e esquerdo dentro de cada espécie. Nem diferença entre as espécies com relação às medidas testiculares. O sêmen, que foi coletado por meio de eletroejaculação com probe retal, foi constituído por uma fração coagulada e uma fração líquida ou ambas. A qualidade do ejaculado foi semelhante entre as espécies. Não sendo observada correlação entre o volume testicular e o volume seminal de S. collinsi e S. vanzolinii, tanto com relação à fração líquida quanto à coagulada. A segunda fase do trabalho teve como objetivo propor um protocolo de congelamento de sêmen de S. collinsi em diluidor a base de ACP-118® (água de coco em pó) testando duas concentrações de glicerol (1,5 e 3%), em laboratório. E a terceira fase objetivou testar um protocolo de resfriamento de sêmen sem adição de gema de ovo, seguido do congelamento com a melhor concentração de glicerol observada no experimento anterior, e aplicar esses protocolos testados em S. collinsi mantidos em cativeiro, nas espécies S. vanzolinii, S. cassiquiarensis e S. macrodon em condições de campo. O sêmen de S. collinsi pôde ser resfriado em diluidor a base de ACP-118® sem ovo gema. O protocolo de congelamento desenvolvido demonstrou ser útil para a criopreservação de sêmen de S. collinsi, embora requeira melhoria para permitir melhor manutenção da qualidade espermática após o descongelamento. O procedimento demonstrou ser aplicável também em condições de campo em animais de vida livre, fornecendo resultados bastante animadores para a formação de bancos de germoplasma de espécies vulneráveis à extinção, como o S. vanzolinii.
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Comparação entre o TRIS, Lactose/TRIS, Ringer-Lactato e Leite Desnatado como diluidores na criopreservação do sêmen bubalino
(Universidade Federal do Pará, 2012-02-29) MIYASAKI, Michel Yoshio Almeida; VALE, William Gomes; http://lattes.cnpq.br/7486151987920142
O objetivo do experimento foi testar a eficácia de diferentes diluidores, a base de Ringer-Lactato, Leite Desnatado, TRIS (hidroxi-methil-amino-methan) e Lactose/TRIS, na criopreservação de sêmen bubalino. Foram utilizados três machos bubalinos da raça Murrah em plena atividade sexual. O sêmen foi colhido por vagina artificial totalizando 71 ejaculados. Após a colheita, cada amostra foi submetida às análises qualitativas e quantitativas do sêmen. Os ejaculados foram fracionados e diluídos nos quatro diluidores. O sêmen diluído foi envasado em palhetas de 0,25ml e submetidos a um tempo de equilíbrio de até quatro horas a 5ºC, com posterior congelação em nitrogênio líquido. As amostras identificadas foram descongeladas em banho maria à temperatura de 40°C por 30 segundos e seqüencialmente avaliadas quanto a motilidade, vigor, lesão de acrossoma, e percentual de patologias espermáticas. As amostras também foram submetidas ao teste de termo-resistência, permanecendo incubadas à temperatura de 40°C durante 30 segundos, 3-5 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas e 3 horas, onde foram avaliadas quanto a motilidade e o vigor espermático. As características físicoquímicas, após análise do sêmen in natura, encontraram-se dentro dos valores preconizados para a espécie bubalina e satisfatórios para o processo de congelação. Após descongelação do sêmen, observou redução numérica estatística (p<0,05) na motilidade espermática, sendo que no sêmen in natura se observou 86,67±6,17% reduzindo para 70±6,92% em TRIS, 67,4±8,01% em Ringer/lactato, 67,09±9,03% em Lactose/TRIS e 59,7±9,05% em leite desnatado e ao comparar entre os quatro tratamentos apenas o Leite desnatado mostrou diferença estatística significativa (p<0,05). Após descongelação, o vigor espermático também diminuiu estatisticamente (p<0,05) nos quatro tratamentos (3,50±0,53 TRIS; 3,38±0,49 Ringer-lactato; 3,3±0,46 Lactose/TRIS e 3,25±0,44 Leite desnatado) versus (4±0,39 sêmen in natura) e ao comparar entre os tratamento, apenas entre Leite desnatado e TRIS se observou diferença estatística (p<0,05). Quanto aos defeitos maiores (4,15±1,9% sêmen in natura; 10,51±4,4% TRIS; 11,94±4,2% Ringer-Lactato; 11,88±4,8% Lactose/TRIS; 12,01±5% Leite desnatado), menores (3,81±1,2% sêmen in natura; 4,67±1,1% TRIS; 4,98±1,7% Ringer-Lactato; 4,93±2,0% Lactose/TRIS; 4,93±2,0% Leite desnatado) e totais (7,91±2,1% sêmen in natura; 15,18±4,7% TRIS; 16,92±4,8% Ringer-Lactato; 16,82±5,6% Lactose/TRIS; 17,11±5,6% Leite desnatado), após descongelação houve aumento significativo dos defeitos nos quatro tratamentos (p<0,05), e entre eles não foram observadas diferenças estatísticas entre si (p>0,05). Na fase pós-TTR, após 3 horas de incubação, a motilidade progressiva (TRIS 21,13±7,5%; Ringer-Lactato 20,78±7,4%; Lactose/TRIS 20,25±5,3%; Leite desnatado 20,12±6,6%) e vigor espermático (TRIS 2,04±0,5; Ringer-Lactato 2,07±0,5; Lactose/TRIS 2,02±0,4; Leite desnatado 2,00±0,5) não apresentaram diferença estatística entre os tratamentos (p<0,05). Quanto a intergridade do acrossoma, após a descongelação (Sêmen in natura 97,85±0,6%; TRIS 91,65±4,3%; Ringer-Lactato 90,46±4,8%; Lactose/TRIS 89,76±5,4%; Leite desnatado 90,56±5,6%), houve diminuição estatística (p<0,05) e quando se comparou tal parâmetro entre os tratamentos não foi observado diferenças estatísticas significativas entre os tratamento (p>0,05). Diante dos resultados observados é possível concluir que a congelação de sêmen de búfalo com os diluidores TRIS (Trishydroxy- methyl-amino-methan), Ringer-Lactato, Lactose/TRIS, e Leite desnatado mostraram satisfatória função de crioproteção na viabilidade espermática do sêmen nas diferentes etapas da criopreservação.
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Criopreservação do sêmen de macaco-prego (Sapajus apella Linnaeus, 1758): avaliação de diferentes diluidores, concentração de glicerol e antioxidante catalase
(Universidade Federal do Pará, 2015-02-24) LEÃO, Danuza Leite; DOMINGUES, Sheyla Farhayldes Souza; http://lattes.cnpq.br/2794753357251149
O objetivo principal do presente estudo foi estabelecer um protocolo eficiente de criopreservação seminal em Sapajus apella para a manutenção da viabilidade espermática. Para isso, foi comparado o desempenho dos diluidores TES-TRIS, ACIN e ACP-118® para escolher do melhor diluidor durante a dissolução do coágulo seminal e resfriamento, para posteriormente ser estabelecido a melhor concentração de glicerol (3; 5 e 7%) a ser adicionado no diluidor, bem como avaliar a suplementação do antioxidante catalase (10 µg e 50 µg) no meio de congelação seminal, no intuito de melhorar os parâmetros espermáticos. Foram utilizados seis machos adultos de S. apella oriundos do Centro Nacional de Primatas. As coletas do sêmen foram realizadas por eletroejaculação com probe retal, após a contenção química dos animais com Cloridrato de Ketamina e Cloridrato de Xilazina. Na primeira fase do projeto, o sêmen obtido foi diluído em TES-TRIS, ACIN e ACP®-118, mantido em banho-maria a 37 °C. Após dissolução do coágulo, o sêmen foi resfriado em geladeira a 4°C por 90 minutos, e avaliadas após 28h quanto a motilidade, o vigor, e o percentual de integridade de membrana antes e após o resfriamento. ACP®-118 foi o melhor diluidor para preservar a motilidade dos espermatozoides e integridade de membrana plasmática após 28 horas de incubação. A partir desse resultado, foi realizada a criopreservação avaliando diferentes concentrações de glicerol (3, 5 e 7%). Os espermatozoides criopreservados a 3% de glicerol apresentaram melhores resultados. Na segunda fase do projeto, foi realizada a criopreservação do sêmen de S. apella em diluidor ACP®-118 suplementado ou não com antioxidante catalase (10µg/mL e 50µg/mL). Todos os tratamentos foram eficazes na manutenção de parâmetros espermáticos, sendo possível a recuperação da motilidade pós-descongelamento. O tratamento catalase 50 foi o melhor de manutenção do vigor durante após resfriamento, e na integridade de membrana plasmática após a descongelação espermática. Em conclusão, ACP-118® pode ser usado de forma eficiente como diluidor para a criopreservação de sêmen S. apella adicionado de 3% de glicerol, além de que a adição do antioxidante catalase mostrou efeito benéfico durante esse processo.
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Efeito do cortisol na produção in vitro de embriões bovinos
(Universidade Federal do Pará, 2014-12-19) ALMEIDA, Nathalia Nogueira da Costa de; MIRANDA, Moysés dos Santos; http://lattes.cnpq.br/3354029928888919; OHASHI, Otávio Mitio; http://lattes.cnpq.br/5547874183666459
O objetivo dessa tese foi avaliar o efeito do cortisol, na maturação oocitária e cultivo de embriões bovinos. No ARTIGO 1 foi analisada a distribuição e localização de receptor de glicocorticóide (GR) por imunocitoquímica em oócitos, células do cumulus, embrião de 2-4 células, 8-16 células, mórula e blastocisto, e foi verificado também a presença de RNAm (rtPCR qualitativa) para GR nos referidos estádios. Os resultados apontam que o GR está presente em todas as células analisadas. A fim de verificar a funcionalidade de GR no desenvolvimento embrionário préimplantacional, a tradução do RNAm para GR foi silenciada em zigotos pela técnica de RNAi, e o desenvolvimento embrionário subsequente foi analisado. A diminuição de transcrito e proteínas de GR pela técnica de RNAi prejudicou o desenvolvimento embrionário (p<0,05. A presença de GR em oócito e células do cumulus nos indica que essas células são sensíveis ao uso de GC. Visto isso, no ARTIGO 2 foi avaliado o efeito de diferentes concentrações do cortisol durante a maturação in vitro (MIV) de oócitos bovinos sobre o desenvolvimento embrionário, índice de apoptose e expressão de gênica (NRF1, COX, TFAM, GLUT1, FASN e HSP70). As concentrações de cortisol utilizadas foram 0,01; 0,1 e 1 μg/mL.. Não houve diferença estatística em relação ao número de células e taxa de clivagem, porém a concentração de 0,1 μg/ml de cortisol aumentou a taxa de blastocisto quando comparada ao grupo controle (sem cortisol na MIV) (41 ± 10 versus 21 ± 1,2; p<0,05; respectivamente). A taxa de apoptose e a expressão gênica em oócitos, células do cumulus, e blastocistos foi avaliada apenas na concentração de 0,1 μg/ml de cortisol. Não houve diferença estatística com relação ao índice apoptótico, e nem com relação à expressão gênica em oócitos e células do cumulus para os genes COX, NRF1, HSP70 e FASN (p>0,05). Em relação à expressão gênica embrionária, apenas as quantificações relativas de RNAm para FASN, GLUT1 e HSP70 estavam aumentadas nos blastocistos tratados com 0,1μg/mL durante a MIV quando comparados aos embriões do grupo Controle (p<0,05), os demais genes não mostraram alteração (p>0,05). No ARTIGO 3 foi analisado o uso do cortisol durante o cultivo in vitro (CIV) de embriões bovinos. Visto que no Capítulo 1 foi identificado GR em todos os estádios de desenvolvimento embrionário e quando a expressão de GR foi silenciada o desenvolvimento embrionário foi prejudicado. Sendo assim, no experimento 3 foram adicionadas diferentes concentrações (0,01; 0,1 e 1 μg/mL) de cortisol na CIV e o desenvolvimento embrionário foi avaliado, mesmos parâmetros do Capítulo 2. Não houve diferença estatística nos embriões tratados com Cortisol em diferentes concentrações quando comparados com o Controle para nenhum dos parâmetros analisados (p>0.05). A concentração de 0,1 μg/mL foi escolhida para avaliar outros parâmetros de qualidade embrionária. Sendo assim, embriões CIV Com ou Sem 0,1 μg/mL de Cortisol, foram analisados quanto à taxa de apoptose e expressão gênica, não sendo observada diferença estatística em nenhuma das análises (p>0,05). Após estes estudos concluímos que oócitos e embriões são responsivos a GC, que a adição de cortisol na MIV melhora a competência oocitária, porém a suplementação com cortisol na CIV não influenciou o desenvolvimento embrionário.
Acesso aberto (Open Access)
Expressão gênica e viabilidade de folículos pré-antrais inclusos em fragmentos de córtex ovarianos cultivados in vitro de macaco-prego (Sapajus apella)
(Universidade Federal do Pará, 2011) BRITO, Adriel Behn de; SANTOS, Regiane Rodrigues dos; http://lattes.cnpq.br/0500967766886604; DOMINGUES, Sheyla Farhayldes Souza; http://lattes.cnpq.br/2794753357251149
O objetivo desse trabalho foi analisar a ativação e o crescimento de folículos préantrais de Sapajus apella, submetidos a um sistema de cultivo in vitro em curto-prazo. Nesse sentido, dois experimentos foram realizados neste trabalho. Experimento I: exposição à fresco e à crioprotetores de biopsias de fragmentos do córtex ovariano. Ambos os fragmentos ovarianos foram submetidos à extração total de RNA e síntese de cDNA. Após a amplificação do cDNA por PCR em tempo-real (RT-PCR), os software GeNorm, bestkeeper e Normfinder foram usados para avaliar a estabilidade dos genes GAPDH (glyceraldehyde-2-phosphate dehydrogenase), HPRT1 (hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1) e TBP (TATA-binding protein). Experimento II: o tecido do córtex ovariano de quatro fêmeas foi oletado e dividido em nove pedaços de 1 mm³. Um fragmento ovariano (grupo controle) foi imediatamente dividido em dois pedaços, os quais foram destinados para análise da viabilidade ou por RT-PCR. Os 8 fragmentos restantes foram individualmente cultivados in vitro em um meio constituído de TCM suplementado com 100 ng/mL EGF (T1), com adição de 10 μM de BME (T2), 100 ng/mL de BMP4 (T3), 25 IU de PMSG (T4), 10 μM de BME e 100 ng/mL de BMP4 (T5), 10 μM de BME, 25 IU de PMSG (T6), 100 ng/mL de BMP4, 25 IU de PMSG (T7) ou 10 μM de BME, 100 ng/mL de BMP4, 25 IU de PMSG (T8). Os resultados demonstraram que no tecido do córtex ovariano de S. apella, os genes HPRT1 e TBP foram os mais apropriados como genes de referência, podendo ser usados como parâmetro para normalizar dados em estudos futuros. Ao contrário, o GAPDH se apresentou como menos estável dos genes de referencia testados. Após o cultivo in vitro, todos os tratamentos alcançaram percentuais similares da viabilidade de folículos pré-antrais. O tecido ovariano cultivado na presença de GF+BME/BMP4/PMSG resultou no aumento da taxa de ativação e crescimento folicular, assim como no aumento da expressão de AMH, BMP15 e GDF9, genes conhecidos como indicadores específicos de desenvolvimento folicular. Dessa forma, o HPRT1 e TBP são os genes de referência mais estáveis, na exposição à crioprotetores, a fresco e no o cultivo de tecidos de córtex ovariano de S. apella. Os folículos pré-antrais são capazes de desenvolverem-se in vitro quando cultivados em meio suplementado com PMSG, BME e BMP4. A viabilidade folicular, entretanto, permaneceu independentemente do meio de cultivo in vitro e o uso de fatores de crescimento, como marcadores de desenvolvimento folicular, foi crucial para identificar o melhor meio de cultivo in vitro.
Acesso aberto (Open Access)
Expressão gênica e viabilidade de folículos pré-antrais submetidos à vitrificação do córtex ovariano de Sapajus apella (macacas-prego)
(Universidade Federal do Pará, 2012-05-25) SANTANA, Luana de Nazaré da Silva; DOMINGUES, Sheyla Farhayldes Souza; http://lattes.cnpq.br/2794753357251149; SANTOS, Regiane Rodrigues dos; http://lattes.cnpq.br/0500967766886604
A vitrificação é uma biotécnica que tem se mostrando cada vez mais promissora em várias espécies, dentre elas ruminantes domésticos (como ovelhas, cabras e vacas), e em primatas não humanos (PNH) (como o cynomologus e rhesus), e consiste na redução ultra-rápida da temperatura mediante a presença de altas concentrações de agentes crioprotetores (ACP’s) em nitrogenio liquido. Desta forma o objetivo deste estudo foi o desenvolvimento de uma metodologia de criopreservação por vitrificação de Folículos Ovarianos Pré-antrais (FOPA’s) em Sapajus apella. Para tanto, foram utilizadas femêas (n=9) adultas de Sapajus apella pertencentes ao plantel do Centro Nacional de Primatas (CENP). Foram realizadas coletas de córtex de tecido ovariano por meio de laparotomia exploratória de modo a não inviabilizar o animal reprodutivamente. Os fragmentos expostos a 8 tratamentos diferentes: Etilenoglicol (EG) 40% + Sacarose (Sac) 0,5 M dissolvidos em TCM-199 adicionados ou não de Selenio (2,5, 5 ou 10 ng/ml) ou Trolox (25, 50 ou 100 mM). Após a exposição aos agentes crioprotetores foi analisada a viabilidade folicular antes e após a vitrificação, a partir da morfologia folicular, expressão dos genes Hsp70, Erp29, Erp60 e Sod1 através da análise por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), além de realizar a dosagem de estresse oxidativo atravéz da TEAC (do inglês Total Equivalent Antioxidant Activity). As análises mostraram que a vitrificação permitiu a manutenção da viabilidade folícular mediante a exposição previa a elevadas concentrações de ACP’s, principalmente quando suplementados com trolox a 50 μM (que resultou em elevadas taxas de sobrevivência folicular) e aumento na expressão da enzima antioxidante Sod1. Enquanto na ausência do mesmo foi observado o aumento nas taxas de folículos degenerados e com vacuolização citoplasmática, além da redução na expressão da enzima antioxidante Sod1 e elevação da expressão da chaperona Erp29.
Acesso aberto (Open Access)
Incubação de ovos e criação de filhotes de guará (Eudocimus ruber) no parque Mangal das Garças: uma ferramenta para a conservação da espécie
(Universidade Federal do Pará, 2015-06-12) MIRANDA, Stefânia Araújo; DOMINGUES, Sheyla Farhayldes Souza; http://lattes.cnpq.br/2794753357251149
A população de guará é considerada extinta em diversas regiões. A reprodução em cativeiro pode ser uma ferramenta importante para a conservação. Os objetivos foram desenvolver um protocolo alimentar e ambientação para a criação de filhotes de guará, intensificar a reprodução e aumentar o número de indivíduos em cativeiro, descrever as fases de desenvolvimento dos filhotes e desenvolver equações para estimar o crescimento. Os filhotes receberam três tipos de dietas: Dieta R (ração comercial), C (ração comercial e camarão) e P (ração comercial e peixe). A condição corporal e o peso dos filhotes foram obtidos diariamente e as medidas corporais a cada sete dias. A taxa de mortalidade na Dieta R foi 100% e nas Dietas C e P foram 0%. As médias dos pesos corporais e comprimentos dos ossos foram maiores com a Dieta P e as médias do comprimento da despigmentação do bico não foram diferentes com as Dietas C e P (P<0,05). A Dieta P apresentou maiores teores nutricionais. No Ano I a criação foi 100% artificial e no Ano II a criação em uma área do parque foi natural. Na criação artificial, o desenvolvimento dos membros e a condição corporal dos filhotes foram avaliados diariamente, e a pesagem a cada sete dias. A taxa de mortalidade foi menor e o número de nascimentos e a taxa de sobrevivência foram maiores durante a criação artificial. Todos os filhotes apresentaram ganho de peso (P<0,05), condição corporal boa e não foram observadas distrofias. As fases de desenvolvimento dos filhotes e o peso foram monitorados diariamente, e as mensurções da despigmentação do bico e ossos foram realizadas a cada sete dias. Os olhos abriram no dia 4,73 ± 0,12, no dia 6,31 ± 0,18 os filhotes se moveram dentro do ninho e no dia 15,3 ± 0,68 sairam do ninho. As médias do peso e das medidas dos ossos aumentaram (P<0,05). As médias da despigmentação do bico diminuiram (P<0,05). No 7º dia o bico começou a pigmentar e no dia 35º ficou completamente pigmentado. A correlação entre todos os parâmetros e os coeficientes de determinação das equações de regressão foram altos. A Dieta P foi considerada a melhor para a criação artificial. O protocolo proporcionou ambientação e alimentação adequadas, intensificou a reprodução e aumentou o número de guarás. Foi possível estabelecer as equações de estimativa de crescimento e descrever as fases de desenvolvimento dos filhotes. A pigmentação do bico foi considerada um parâmetro eficiente para estimar a idade.
Acesso aberto (Open Access)
Polimorfismos na região promotora, Éxon I e Éxon II do gene do receptor da melatonina associados às características reprodutivas em búfalas na Amazônia
(Universidade Federal do Pará, 2015-06-18) BARBOSA, Elizabeth Machado; RIBEIRO, Haroldo Francisco Lobato; http://lattes.cnpq.br/1614582293203770
A produção de bubalinos no Estado do Pará é uma atividade de alta representatividade para a economia regional e produção de carne, leite e derivados. Portanto, é necessário desenvolver novas tecnologias que aumente o desfrute da produção e reprodução de bubalinos na região Amazônica. Sendo assim, os objetivos desta tese de pesquisa foram caracterizar a região promotora do gene do receptor da melatonina 1 A (MTRN1A) e identificar polimorfismos nos éxons I e II do referido gene e associá-los a características reprodutivas de relevância econômica em búfalas na região Amazônica. Foram coletados amostras de pelos de 400 búfalas e foram usados 60 animais para caracterização da região promotora, 140 para detectar o polimorfismo (SNPs) no éxon II e 77 para detectar o polimorfismo no éxon I. Foi realizada a extração de DNA pelo método fenólico. Em seguida selecionaram-se os diferentes iniciadores para realizar as reações em cadeia da polimerase (PCR). A região promotora do MTRN1A foi sequenciada em um total de 1621 pares de base pelo método de Sanger, o polimorfismo no éxon II foi detectado através da técnica de PCR-RFLP (Polimorfismo de restrição de comprimento de fragmentos) com a enzima HpaI e o polimorfismo no éxon I foi detectado através do sequenciamento de DNA pelo método Sanger. Foram avaliadas as frequências alélicas e genotípicas de todos os SNPs, os coeficientes de endocruzamento (Fis) e as probabilidades de Hardy-Weinberg. Os SNPs da região promotora e do éxon I foram associados com características reprodutivas das búfalas pelo ANOVA, ou teste t de Student e/ou teste qui-quadrado. O nível de significância foi de 0,05. Foram detectados 26 SNPs na região promotora nas posições -1511 (C→T), -1465 (G→T), -1422 (A→G), -1411 (G→A), - 1395 (G→T), -1298 (A→G), -1295(G→A), -1242 (A→C), -1150 (C→T), -1147 (G→C), - 1136(A→G), -911 (G→A), -909 (A→G), -724 (C→G), -656 (A→C), -649 (T→C), -644 (G→A), -511 (A→C), -481 (G→A), -425 (C→T), -395 (G→A), -383 (G→T), -254 (C→T), - 206 (T→C), -133 (T→G) e -94 (C→T) e um bloco de deleção (ACAA) na posição -1483. Do total de SNPs detectados, 75% dos alelos selvagens tiveral frequências maiores que 0,5. Para a característica Intervalo entre Parto (IEP), somente cinco SNPs (-1298, -1136, -911, -724 e - 656) foram significativamente associados (P<0,05) e outros três SNPs (-1395, -724 e -94) foram associados significativamente (P<0,05) com a característica Idade ao Primeiro Parto (IPP) e nenhum para a característica concentração de partos (P>0,05). Um total de 11 SNPs foi fortemente associado a fatores de ligação para a regulação gênica. O SNP no éxon II por PCR-RFLP (HpaI) na posição 306 de (T→C), sendo o alelo T mais frequente nos animais de Terra Firme (0,529) e o C em animais de Várzea, as duas populações apresentaram coeficientes de endocruzamento Fis (0,040 e 0,091, respectivamente) e fortes desvios de Hardy-Weinberg (P>0,05). A mutação ocorre no 106° codon e é do tipo sinonímio sem alteração da estrutura de alças do RNA mensageiro. O SNP no éxon I foi detectado na posição 62 (T→C) e do tipo não sinonímio, trocando de Leucina para Prolina. O alelo mutante C foi o mais frequente (0,623), coeficiente de endocruzamento Fis=0,397 e desvios de Hardy- Weinberg (P<0,05). Nenhum dos genótipos foram associados ao interval entre partos e a idade do primeiro parto (P>0,05). Portanto, os SNPs são fortes candidatos para seleção, mas seria interessante avaliá-los em outros rebanhos na região Amazônica e/ou em outras regiões do Brasil e/ou em outros países para efetivá-los como excelentes marcadores moleculares para características reprodutivas de bubalinas.
Acesso aberto (Open Access)
Polimorfismos no gene da osteopontina e suas associações com a fertilidade de búfalos na Amazônia
(Universidade Federal do Pará, 2012-09-24) ROLIM FILHO, Sebastião Tavares; RIBEIRO, Haroldo Francisco Lobato; http://lattes.cnpq.br/1614582293203770
Este trabalho teve como objetivo identificar polimorfismos neste gene e associar os mesmos aos parâmetros de fertilidade de búfalos criados de forma extensiva. Foram utilizados 306 machos bubalinos, acima de 18 meses de idade, criados em duas propriedades, uma no estado do Amapá e outra no estado do Pará. Os resultados obtidos para a extração de DNA através de pêlos foram de excelente quantidade, com concentração maior que 50ng/l. Ambos pares de primers amplificaram as regiões específicas do gene da osteopontina. Foram identificados 3 polimorfismos do tipo SNP para a região amplificada pelo primer OS4 (5`UTR) e 4 polimorfismos do tipo SNP para a região amplificada pelo primer OS9 (éxon 5 ao éxon 6). Os polimorfismos foram nas posições 1478, 1513 e 1611 na região amplificada pelo OS4 e nas posições 6690, 6737, 6925 e 6952 na região amplificada pelo OS9. Para todas as características estudadas foram encontrados SNPs significativos a 5%. Para circunferência escrotal, o SNP 6690; para volume testicular, o SNP 6737; para a concentração, o SNP 6690; para motilidade, o SNP 6690 e para patologia espermática, o SNP 6690. Estando os polimorfismos do SNP 6690 relacionado com quatro características. Para a característica CE o genótipo AA foi associado (P<0,05) com os animais que apresentaram maior média de circunferência escrotal, maior média de concentração espermática, maior média de motilidade e menor número de patologias totais. Entretanto, para a característica volume testicular, os animais que apresentaram maior volume estão correlacionados com a presença do genótipo GG, para o SNP 6737. Isso indica que o gene da osteopontina pode influenciar as características reprodutivas em machos bubalinos.
Acesso aberto (Open Access)
Puberdade em caititus (Tayassu tajacu): estudo da espermatogênese em diferentes faixas etárias
(Universidade Federal do Pará, 2009-05-20) CARDOSO, Deise de Lima; FERREIRA, Maria Auxiliadora Pantoja; http://lattes.cnpq.br/1832728101486131; GUIMARÃES, Diva Anelie de Araújo; http://lattes.cnpq.br/2891287458034896
Esta pesquisa analisa o desenvolvimento da espermatogênese em caititus (Tayassu tajacu) e determina a idade em que atingem a puberdade, considerando-se a biometria testicular e dos túbulos seminíferos, a quantificação das células espermatogênicas, a descrição morfológica dos estádios do ciclo do epitélio seminífero (CES), a freqüência relativa com a qual aparecem no interior dos túbulos seminíferos e o rendimento geral da espermatogênese. No experimento, os animais foram divididos de acordo com a faixa etária, em cinco grupos, com três animais em cada grupo, sendo G1 (7 a 8 meses), G2 (9 a 10 meses), G3 (11 a 12 meses), G4 (13 a 14 meses) e G5 (15 a 16 meses). Os animais foram submetidos à cirurgia de orquiectomia, para obtenção das amostras testiculares, as quais foram fixadas em solução de Alfac por 24 horas e processadas histologicamente, onde cortes de 5 μm foram corados em Hematoxilina-Eosina. Tendo como base, o método da morfologia tubular, foi feita a quantificação dos tipos celulares corrigidos para seus diâmetros nucleares médios de 10 secções transversais de túbulos seminíferos no estádio 1 do CES para animais com a espermatogênese estabelecida e 20 secções transversais para os animais mais jovens, nos quais não havia atividade espermatogênica estabelecida; e também a classificação dos estádios do ciclo do epitélio seminífero, por meio da análise de 100 secções transversais de túbulos seminíferos. Os dados da biometria testicular, a saber, o peso, o comprimento e a largura, revelaram crescimento constante e gradual com diferenças estatísticas significativas (p<0,05) e alta correlação entre si. Os valores do diâmetro tubular apresentaram significância estatística do G1 ao G4, a partir deste, tiveram crescimento acelerado e contínuo, não havendo significância estatística (p >0,05). De acordo com as análises quantitativas e morfológicas das células espermatogênicas que compõem o epitélio germinativo, os grupos etários dos animais foram classificados nas fases seguintes: impúbere (G1), pré-púbere (G2), puberdade (G3), pós-puberdade 1 (G4) e pós-puberdade 2 (G5). A fase em que ocorreu o início da atividade reprodutiva, ou seja, a puberdade, foi determinada nos animais a partir de 11 meses de idade, onde ocorreu o maior crescimento no número de células espermatogênicas e uma correlação positiva com o peso testicular. Nessa fase, as células de Sertoli, apresentaram um decréscimo significativo (p<0,05). Na determinação da freqüência relativa dos estádios do ciclo do epitélio seminífero, foram observadas oito tipos de associações, segundo o método da morfologia tubular, onde o estádio com maior e menor freqüências foram o 1 e o 3, respectivamente. A fase pós-meiótica, apresentou maior freqüência e a fase meiótica, a menor, sendo estatisticamente significativa em relação às demais. A eficiência reprodutiva foi demonstrada por meio dos valores traduzidos pelas razões celulares entre as espermatogônias do tipo A e espermátides arredondadas, não tendo sido observado aumento significativo das espermátides arredondadas entre os grupos G3 ao G5 (p>0,05); e o índice das células de Sertoli apresentou diferença estatística significativa entre todas as possíveis comparações dos grupos etários do G3 ao G5 (p <0,05).
Acesso aberto (Open Access)
Respostas termográficas em touros bubalinos submetidos à coleta de sêmen e avaliados sob condições agrometeorológicas no trópico úmido
(Universidade Federal do Pará, 2014-04-30) BARROS, Daniel Vale; LOURENÇO JÚNIOR, José de Brito; http://lattes.cnpq.br/2919433679918544; GARCIA, Alexandre Rossetto; http://lattes.cnpq.br/2678267039338224
A produção de búfalos (Bubalus bubalis) está praticamente concentrada entre os trópicos, onde predominam elevadas temperaturas. Portanto, o conhecimento da resposta desses animais frente ao ambiente tropical e às mudanças climáticas são essenciais. Assim, o objetivo do trabalho foi avaliar a variação dos índices de conforte térmico, parâmetros fisiológicos, hemáticos, seminais e de temperaturas superficiais de touros bubalinos mantidos sob clima tropical úmido (Afi de Köppen). Dez búfalos foram mantidos em baias coletivas, com acesso à sombra. Durante os meses de abril a agosto de 2013 foram obtidos dados climatológicos de estação meteorológica e dataloggers, instalados no interior das baias para cálculo do índice de temperatura e umidade (ITU). Foram aferidas frequência respiratória (FR), frequência cardíaca (FC), temperatura retal (TR), temperatura superficial de globo ocular (GLO), temperatura superficial do escroto (ESC), temperatura superficial do flanco direito (FLd) e esquerdo (FLe) e calculado o índice do conforto térmico de Benezra (ICB). Foi realizada coleta de sêmen semanalmente por vagina artificial, e realizada coleta de sangue para avaliação do hemograma mensalmente. A média da temperatura máxima do ar foi de 31,5ºC e a média da umidade relativa máxima foi de 93,2%. O ITU apresentou diferença somente entre turnos (P<0,05). A FR, FC e ICB apresentaram incrementos significativos ao longo dos meses e com diferença entre turnos (P<0,05). Já a TR apresentou diferença entre turnos e variação decrescente nos meses, com menor valor em agosto (37,8±0,7ºC). Para os valores de TR, GLO, FLd, FLe e ESC houve diferença (P<0,05) tanto para o turno quanto para os meses. O hematócrito, volume corpuscular médio, hemoglobina corpuscular média, concentração de hemoglobina corpuscular média, turbilhonamento e vigor espermático apresentaram diferença significativa (P<0,05) ao longo dos meses. As maiores correlações obtidas entre ITU e temperaturas superficiais foram entre ITUmed e FLdmed (0,77; P<0,0001), ITUmed e FLemed (0,75; P<0,0001), ITUmed e GLO (0,72; P<0,0001), e ITUmed e ESC (0,41; P<0,0001). A maior correlação entre temperatura interna e temperatura superficial foi de TR e GLOmax (0,58; P<0,0001). Correlações significativas foram encontradas entre ICB e FR (0,97; P<0,0001), ICB e FC (0,89; P<0,0001), FC e FR (0,87; P<0,0001), ITU e integridade de membrana plasmática dos espermatozoides (-0,17; P<0,05). Os resultados mostraram que, apesar dos animais apresentarem variações no índice de conforto de Benezra e elevação da temperatura superficial nos períodos mais quentes, os touros foram capazes de manter a homeotermia. Por fim, concluiu-se, também, que a termografia infravermelha pode ser usada como uma ferramenta não invasiva e auxiliar nos estudos sobre a fisiologia da termorregulação animal.
Acesso aberto (Open Access)
Respostas termolíticas e qualidade seminal de ovinos naturalizados criados em ambiente tropical
(Universidade Federal do Pará, 2015-10-30) KAHWAGE, Priscila Reis; GARCIA, Alexandre Rossetto; http://lattes.cnpq.br/2678267039338224
O estudo visou aprofundar o conhecimento sobre as características anátomo-fisiológicas relacionadas à capacidade de perda de calor corpóreo e sua relação com a qualidade seminal de machos ovinos naturalizados ao ambiente tropical. Nove machos da raça Santa Inês (SIN) e sete da raça Morada Nova (MN) foram submetidos a dois experimentos. O primeiro ensaio compreendeu o monitoramento das características de pelame (quantidade de melanina, espessura de capa, comprimento e diâmetro dos pelos), da taxa de sudação, dos indicadores fisiológicos de conforto térmico (frequência respiratória, frequência cardíaca, temperatura retal, temperatura de superfície de pelame, temperatura de epiderme e temperaturas superficiais escrotais) da qualidade seminal (concentração espermática, motilidade progressiva, integridade de membrana plasmática, defeitos maiores, defeitos menores e defeitos totais) e integridade do parênquima testicular aliados às variáveis metereológicas, aferidas ao longo do ano. A análise estatística foi realizada com uso dos procedimentos GLM e LSMEANS do programa SAS, versão 9.1.3. Diferenças significativas (P<0,05) foram observadas entre o verão e as estações mais amenas do ano (outono e inverno), havendo incremento dos parâmetros termolíticos durante a estação quente. Já a qualidade seminal não variou ao longo do ano. No segundo experimento, foi avaliada a capacidade de manutenção da homeotermia corpórea e testicular de ovinos naturalizados sob desafio térmico. Os animais foram submetidos ao teste de tolerância ao calor que consiste na manutenção do animal à sombra (período 1), seguida de exposição ao sol (período 2) e retorno à sombra (período 3). Nos três períodos foram aferidos: frequência respiratória, frequência cardíaca, temperatura de superficiais de tronco, dorso, globo ocular e bolsa escrotal, por termografia infravermelha. O nível de adaptabilidade dos animais foi medido pelo índice de tolerância ao calor. A qualidade seminal e integridade de parênquima testicular foram avaliadas antes e após o desafio térmico. No Período 1, as variáveis apresentaram valores basais, em ambos os genótipos. No Período 2 observou-se incremento significativo das variáveis envolvidas na termólise (P<0,05), condizente com situação de desconforto térmico. No Período 3, as variáveis retomaram os valores basais, e algumas apresentaram valores mais baixos que os observados no Período 1. As variáveis seminais e ultrassonográficas não sofreram ação do insulto térmico. Conclui-se que ovinos MN e SIN apresentam eficientes mecanismos termolíticos que favorecem a preservação da funcionalidade gonadal, sendo considerados resilientes ao desafio térmico imposto em sistemas de produção em clima tropical.
Acesso aberto (Open Access)
Ultrassonografia testicular, em machos bubalinos criados em regime extensivo no estado do Pará
(Universidade Federal do Pará, 2011-07-07) MANRIQUE AYALA, Henry Daniel; RIBEIRO, Haroldo Francisco Lobato; http://lattes.cnpq.br/1614582293203770
O objetivo foi verificar pela ultrassonografia associada à biometria testicular como ferramenta na seleção de precocidade sexual em machos bubalinos. Foram usados 19 machos mestiços das raças Murrah e Mediterrâneo, com idades entre 11 a 59 meses, no período de 06 de maio a 18 de novembro de 2010. Os animais foram divididos em 12 faixas etárias: 8 animais de 12 a 19 meses; 3 animais de 20 a 29 meses; e 8 animais de 30 a 59 meses. Os animais foram mantidos em sistema extensivo, em área de várzea com pastagem de canarana (Eriochloa SP) sem mineralização. Os animais foram submetidos a exame clínico andrológico, com colheita de sêmen por massagem transretal das ampolas e análises físicas do ejaculado. Os exames ultrassonograficos foram realizados com o aparelho modelo Mindray DP-2200, com transdutor linear transretal 75L50EAV, multi-frequencial de 5,0/7,5/10,0 MHz. A ecodensidade testicular (ECOt) foi expressa em quantidade de pixels/área, utilizando o Programa Image J. Foram coletadas amostras sanguíneas para aferição dos níveis de testosterona. A análise estatística foi feita utilizando-se o programa estatístico SAS 1999. Os resultados da circunferência escrotal mostram médias e desvios padrão mínimo e máximo de 12.88±0.51cm para animais de 12 e 13 meses e de 28.38±0.38cm nos machos com idade maior ou igual a 60 meses, respectivamente. As medidas de volume testicular apresentaram valores mínimo e máximo de 30.28±17.37cm³ em animais de 12 e 13 meses e de 534.25±25.36 cm³ nos animais maiores ou iguais a 60 meses, respectivamente. As médias e desvio padrão da concentração espermática mínima e máxima encontrada foram de 5.5± 3.5(x 10⁶ /mm³) para os animais de 16 e 17 meses e de 51.41± 26.02 (x 10⁶ /mm³) para os maiores ou iguais a 60 meses, respectivamente. Na motilidade espermática as porcentagens mínima e máxima obtidas foram de 10% para animais com 16 e 17 meses e de 80±5.77% para maiores ou iguais a 60 meses, respectivamente. Os defeitos espermáticos totais mínimos e máximos encontrados foram de 18.5 % nos animais de 16 e 17 meses e 3%. Nos maiores ou iguais a 60 meses, respectivamente. Os níveis de testosterona mínimos e máximos encontrados foram de 0.070±0.026 ng/ml para 12 e 13 meses e de 2.762± 0.457 ng/ml para os animais maiores ou iguais a 60 meses, respectivamente. A ecogenicidade para animais na faixa etária de 12 a 13 meses foi de 78.67±6.36 pixel, na faixa de 14 e 15 meses foi de 94.22±3.40 pixel, para os animais com idades de 16 e 17 meses foi de 88.16±3.95 pixel, nos animais entre 18 a 19 meses foi de 96.09±3.40 pixel, para os animais de 20 e 21 meses foi de 103.12±3.86 pixel, para 22 e 23 meses foi de 98.4±5.87 pixel, para a idade de 24 aos 29 meses foi de 114.05±2.42 pixel, na faixa etária de 30 aos 35 meses foi de 109.24±3.13 pixel, para animais de 36 aos 41meses foi de 98.67±3.05 pixel, entre 42 a 47 meses a média foi 99.33±2.01 pixel, entre 48 a 59 meses foi de 96.17±1.90 pixel e nos animais maiores ou iguais a 60 meses de idade foi de 90.13±1.77 pixel. Concluímos, assim, que a ultrassonografia, pela interpretação da ecogenicidade, associada ao exame clinico andrológico, é uma ferramenta que pode ser usada na seleção de precocidade e avaliação de fertilidade de machos bubalinos.
Acesso aberto (Open Access)
Utilização de células de trofoblasto de embriões partenogenéticos na descrição de haplótipos de BoLA-DRB3-DQA-DQB
(Universidade Federal do Pará, 2015-03-30) SÁ, André Luiz Alves de; MIRANDA, Moysés dos Santos; http://lattes.cnpq.br/3354029928888919
A perspectiva de aumentar a produtividade do gado bovino a partir da aplicação de melhoramento genético do rebanho é cada vez mais estudada. Dentre as regiões genômicas mais estudadas e promissoras têm-se o Complexo Principal de Histocompatibilidade (MHC), já que este reúne genes importantes na resposta imunológica do animal, sendo possível selecionar marcadores nesta região para maior resistência a enfermidades e, portanto, maior produção pecuária. A diversidade do MHC bovino, conhecido como BoLA (Bovine Leukocyte Antigens), foi estudada inicialmente investigando seus genes isoladamente. A maioria dos bovinos são heterozigotos em BoLA e apenas em ocasiões especiais (animais homozigotos ou que possuam informação de pedigree) seu haplótipo pode ser caracterizado. Portanto, este trabalho objetivou desenvolver uma nova abordagem para descrever haplótipos de BoLA de vacas heterozigotas, utilizando células do trofoblasto de embriões partenogenéticos bovinos. Dois métodos para validação desta abordagem foram utilizados: um painel de 445 SNPs em BoLA foi informativo acerca do efeito que a recombinação meiótica apresenta na zigose da região; e a comparação de alelos de BoLA-DRB3 entre a fêmea bovina e sua célula trofoblástica partenogenética (CTP) demonstrou ser um método confiável e prático para a investigação de homozigose em BoLA. A partir de ambos os métodos, a metodologia desenvolvida aqui foi validada, já que CTPs homozigotas em BoLA foram derivadas de vacas heterozigotas, permitindo a descrição de haplótipos de BoLA. A análise detalhada da região de Classe IIa de BoLA-DRB3-DQA-DQB revelou a presença de 18 haplótipos distintos, sendo 16 destes nunca antes descritos. Além disso, dois alelos de DQA e um de DQB presentes nestes haplótipos são novos. O método descrito aqui foi mais eficiente do que a investigação por fêmeas homozigotas ou inferir a composição haplotípica baseada em informação de pedigree, além de evitar ambiguidades nos resultados. Novas pesquisas buscando a otimização deste método podem aumentar a sua eficiência e torná-lo mais facilmente aplicável a uma variedade de estudos genéticos, usando espécies diferentes e com finalidades distintas.
Acesso aberto (Open Access)
Viabilidade da dose fracionada de sêmen bovino criopreservado descongelada por diferentes métodos
(Universidade Federal do Pará, 2010-05-21) ARAUJO, Gilson Ferreira de; RIBEIRO, Haroldo Francisco Lobato; http://lattes.cnpq.br/1614582293203770
Considerando a baixa concentração espermática necessária para promover a fecundação de oócitos na FIV, objetivou-se com este trabalho avaliar a qualidade da dose de sêmen bovino criopreservada após o seu fracionamento em duas partes visando um maior aproveitamento da mesma em programa de PIV. O experimento foi realizado utilizando 110 doses de sêmen congeladas em palhetas de 0,25 mL proveniente de 10 touros, que foram divididas em etapas: Uma dose representou o grupo controle, 5 foram destinadas para o grupo de descongelação direta (DD) e 5 para o grupo de descongelação indireta (DI). As doses foram fracionadas em duas partes, formando para cada grupo dois subgrupos, unidade da esfera (UE) e unidade do álcool polivinílico (UAP). O primeiro subgrupo teve análise imediata; e o segundo foi analisado após 24h de armazenamento em N2. Os dados foram analisados por estatística descritiva, teste de Kruskal-Wallis e SNK (P < 0,05), apresentando motilidade e vigor: DI- imediata: 48,8% / 2,4; DI-24h: 54,2% / 2,5; DD-imediata: 67,8% / 3,0; DD-24h: 69,6% / 3,0; Controle: 70% / 3,0. Para lesão de acrossoma e integridade da membrana: DI- imediata: 24,3% / 40,5%; DI-24h: 36,2% / 44,3%; DD-imediata: 12,8% / 63,6%; DD-24h: 12,6% / 59,0%; controle: 11,9% / 57,5%. Média de concentração espermática: DI- imediata: 6,1×106 DI-24h: 7,2×106; DD- imediata: 8.2×106; DD-24h: 7.8×106 espermatozóide/fração de dose. Deste modo para o fracionamento da dose de sêmen bovino criopreservado o melhor método de descongelação foi o direto, uma vez que apresentou os melhores resultados em todos os parâmetros analisados.

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